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为什么将Cell Counting Kit (CCK-8)作为细胞增殖与毒性检测好选择？
阅读次数：688发布时间：2017/3/2 15:39:19
很多的科研的同学需要做增殖细胞增殖相关实验，而且想让自己的实验比较有说服力，不少童鞋都是有请教大神做哪种实验的好，是CCK-8、WST-1、MTT法、XTT法哪种实验比较有说服力？这时候问题就来了为什么将Cell Counting Kit (CCK-8)作为细胞增殖与毒性检测佳选择？看过来人的经验之谈。
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），适用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
实验原理：
WST-8属于MTT的升级产品，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。
为什么将Cell Counting Kit (CCK-8) 作为细胞增殖与毒性检测佳选择：
如下表，CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较，结果不言而喻！
1、在96孔板中配置100 μl 的细胞悬液（2000-5000 cells）。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、向培养板加入10 μl 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要让孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
艾美捷作为Abbkine中国区域总代理，为客户提供具性价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物，蛋白质纯化产品以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或区域代理，艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣，请致电免费客户专线400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。文章来自： http://www.amyjet.com/featured/cck8-cell-counting-kit.shtml
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），适用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
实验原理：
WST-8属于MTT的升级产品，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。
为什么将Cell Counting Kit (CCK-8) 作为细胞增殖与毒性检测佳选择：
如下表，CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较，结果不言而喻！
| 检测方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
| 甲臜产物的水溶性 | 差（需加有机溶剂溶解后再检测） | 好 | 好 | 好 |
| 产品性状 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
| 使用方法 | 配成溶液后使用 | 现配现用 | 即开即用 | 即开即用 |
| 检测灵敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
| 检测时间 | 较长 | 较短 | 较短 | 短 |
| 检测波长 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
| 细胞毒性 | 高，细胞形态完全消失 | 很低，细胞形态不变 | 很低，细胞形态不变 | 很低，细胞形态不变 |
| 试剂稳定性 | 一般 | 较差 | 一般 | 很好 |
| 批量样品检测 | 可以 | 非常适合 | 非常适合 | 非常适合 |
| 便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
* 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到佳测定时间
* 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰（扣除空白孔即可）
CCK-8法细胞增殖-毒性检测* 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰（扣除空白孔即可）
| 产品名称及描述 | 货号 | 产品说明 |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | KTC011001 | 详情 |
1、在96孔板中配置100 μl 的细胞悬液（2000-5000 cells）。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、向培养板加入10 μl 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10 μl CCK-8溶液（不要让孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
艾美捷作为Abbkine中国区域总代理，为客户提供具性价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物，蛋白质纯化产品以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或区域代理，艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。如果您对上述产品感兴趣，请致电免费客户专线400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂询相关的产品信息及完整实验解决方案。文章来自： http://www.amyjet.com/featured/cck8-cell-counting-kit.shtml
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