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武汉艾美捷科技有限公司

产品介绍

艾美捷支原体检测试剂盒建议的方案及样本数据

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发布日期:2022/11/7 16:53:46

更新日期:2022/11/7 16:53:46

详细内容

 艾美捷SouthernBiotech支原体检测试剂盒旨在门检测细胞培养物中潜在的支原体污染。该试剂盒结合了聚合酶链反应(PCR)来扩增支原体内保守的16S核糖体RNA编码区基因组,从而提供了一种广泛、高灵敏度和高效的检测方法。仔细确定的引物序列三个属的支原体(支原体、无支原体和脲原体),使该试剂盒能够检测95%以上的潜在细胞培养物感染。

 

支原体检测试剂盒中的PCR技术快速(结果通常在不到3小时内获得)且易于使用。工具包也高度敏感,可在100µL测试样品上清液中检测到低至2-5毫微克的支原体DNA。真核生物的并且来自细胞培养上清液的细菌DNA不被试剂盒扩增。感染支原体的样本细胞系将在琼脂糖凝胶上产生约448bp至约611bpPCR产物,具体取决于支原体的类型。包括阳性对照(M.orale503bp),以验证PCR扩增过程具有以及确认在测试样品中获得的PCR产物的大小。还提供内部控制以消除与PCR抑制剂相关的潜在假阴性。

 

艾美捷支原体检测试剂盒建议的方案

•试剂制备

o离心所有组件管,以确保材料完全沉降到底部

o使用不含DNase的水重新配制底漆/dNTP混合物、阳性和内部对照,如下所示-

底漆/dNTP混合物-260µL

阳性对照-200µL

内部控制-200µL

o涡流5,以确保充分混合并在室温下平衡5分钟

o涡流,然后再次离心

o重组试剂应储存在-20°C或以下;避免多次冷冻/解冻循环

•样品制备

o100μL细胞培养上清液*转移到无菌的200μL PCR管中;确保盖子密封严实,以防

蒸发

o将样品上清液在95°C下加热5分钟

o以大速度快速旋转样品上清液5,以去除细胞碎片;上清液现在

准备加入PCR主混合物

*该试剂盒为从细胞培养上清液中检测支原体而设计。对于血清或细胞裂解物样品,DNA

建议在测试提取,以避免PCR抑制。

•热循环计划

PCR主混合

•琼脂糖凝胶电泳

•凝胶评价

•如果样品的PCR被抑制,则可以通过进行DNA分析来轻松去除抑制剂

 

艾美捷支原体检测试剂盒样本数据

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相关文献:

1. Lamb SA, Rahman MM, McFadden G. Recombinant myxoma virus lacking all poxvirus ankyrin-repeat proteins stimulates multiple cellular anti-viral pathways and exhibits a severe

decrease in virulence. Virology. 2014;464-5:134-45.

2. Frampton GM, Ali SM, Rosenzweig M, Chmielecki J, Lu X, Bauer TM, et al. Activation of MET via diverse exon 14 splicing alterations occurs in multiple tumor types and confers clinical

sensitivity to MET inhibitors. Cancer Discov. 2015;5:850-9.

3. Modur V, Joshi P, Nie D, Robbins KT, Khan AU, Rao K. CD24 expression may play a role as a predictive indicator and a modulator of cisplatin treatment response in head and neck

squamous cellular carcinoma. PLoS One. 2016;11(6):e0156651.

4. Campos-Gomez J, Ahmad F, Rodriguez E, Saeed MF. A novel cell-based assay to measure activity of Venezuelan equine encephalitis virus nsP2 protease. Virology. 2016;496:77-89.

5. Wang X, Shaw DK, Hammond HL, Sutterwala FS, Rayamajhi M, Shirey KA, et al. The prostaglandin E2-EP3 receptor axis regulates Anaplasma phagocyhilum-mediated NLRC4

inflammasome activation. PLoS Pathog. 2016;12(8):e1005803.

6. Baird JR, Feng Z, Xiao HD, Friedman D, Cottam B, Fox BA, et al. STING expression and response to treatment with STING ligands in premalignant and malignant disease. PLoS One.

2017;12(11):e0187532.

 

来源:https://www.amyjet.com/products/13100-01.shtml

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