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MyBioSource丨艾美捷 肠激酶活性检测试剂盒
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发布日期:2022/3/25 17:05:58
更新日期:2022/3/25 17:05:58
详细内容
MyBioSource 艾美捷 肠激酶活性检测试剂盒--利用含有肠激酶特异性识别序列且带有AFP荧光标记的多肽底物,在肠激酶的催化作用下,该多肽底物被裂解,并释放AFC分子,继而通过测量其在Ex/Em = 380/500 nm的荧光强度,达到检测肠激酶活性的目的。
AFC标准曲线(a)。用人肠肽酶检测试剂盒(b)的灵敏度。按照试剂盒方案进行分析。
MyBioSource 艾美捷该试剂盒化验程序:
1.AFC标准曲线:通过向90µl肠肽酶分析缓冲液中添加10µl 1 mM AFC标准溶液,将AFC标准溶液稀释至100µM(100 pmol/µl)。将0、2、4、6、8和10µl稀释的100µM AFC标准加入96孔板中的系列孔中,以生成0、200、400、600、800和1000 pmol/孔的AFC标准。用肠肽酶分析缓冲液将终体积调节至100µl。
2.样品制备:在96孔板的每个孔中加入1-50微升具有肠肽酶活性的样品。将5-10µl肠肽酶(阳性对照)添加到所需孔中。用肠肽酶分析缓冲液将阳性对照和样品孔的终体积调节至50µl。平行制备带有50µl肠肽酶分析缓冲液的底物背景控制井和带有样品+肠肽酶分析缓冲液的样品背景控制井。
3.反应混合物:混合足够多的试剂,以满足要进行的分析数量。对于每个孔(样品、阳性对照和背景对照),制备50µl混合物,其中包含:
Reaction Mix Background Control Mix
Enteropeptidase Assay Buffer 48 µl 50 µl
Enteropeptidase Substrate 2 µl ---
4.测量:室温下培养30-60分钟,在Ex/Em=380/500 nm下测量荧光。
注:培养时间取决于样品中的肠肽酶活性。建议在动力学模式下测量荧光,并在线性范围内选择两个时间点(T1和T2)来计算样品的肠肽酶活性。AFC标准曲线可在终点模式下读取(即在培养时间结束时)。
艾美捷科技是MyBioSource的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。