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ELISA试剂盒实验标本易出现的问题

阅读次数：111发布时间：2017/2/7 10:19:57

ELISA试剂盒标本受细菌污染

因菌体中也许富含内源性辣根过氧化物酶，因而，被细菌污染的标本同溶血标本相同，亦可发生非特异性显色而搅扰测定成果。

标本保留不当

在冰箱中保留过久的标本，血清中IgG可聚组成多聚体、AFP可构成二聚体，在间接法ELISA测定中会致使本底过深、乃至构成假阳性；标本放置时刻过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性削弱，亦可出现假阴性。

为战胜上述搅扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜收集；如不能当即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，ELISA试剂盒1周后测定的血清标本应低温冻存。

冻存后融解的标本，蛋白质有些浓缩，散布不均，应充沛混合后再测定，但混匀时应轻柔，不行激烈振动。

标本溶血

ELISA试剂盒标本凝集不全

在没有促凝剂和抗凝剂存在的状况下，正常血液收集后1/2~2h开端凝结，18~24h彻底凝结。临床查验工作中，有时为了争取时刻迅速检测，常在血液还未开端凝结时即强行离心别离血清，此刻的血清中仍残留有些纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够构成肉眼可见的纤维蛋白块，易构成假阳性成果；这类状况于次日复查时因血凝已彻底，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查成果变为阴性。

因为各种人为原因致使的标本溶血，均可因红细胞损坏溶解时释放出很多具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为符号的ELISA测定中，会致使非特异性显色，搅扰测定成果。

ELISA试剂盒为战胜上述搅扰效果，标本收集时有必要留意防止溶血。

为防止上述搅扰效果，处理的办法佳是血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清，或标本收集时用带别离胶的采血管或于采血管中参加恰当的促凝剂。

ELISA试剂盒标本管中增加物质的影响

抗凝剂（如肝素，EDTA）、酶抑制剂（如NaN3可抑制ELISA体系中辣根过氧化物酶活性）及迅速别离血清的别离胶等均对ELISA测定有一定搅扰效果。

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