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ELISA试剂盒两大步骤
阅读次数:127发布时间:2017/6/12 10:01:14
试验有效性判断;阴性对照:正常情况下,阴性对照孔OD450值≤0.2;阳性对照:正常情况下,阳性对照孔OD450值≥0.4;临界值(C.O.)核算:临界值=0.2+阴性对照均值;阴性对照OD450值大于0.2时应放弃,如所有阴性对照OD450值均大于0.2时须重复试验;阴性对照低于0.05时以0.05核算。
elisa试剂盒操作过程
病毒性肠炎(DVE),又名瘟(DP)是由病毒性肠炎病毒(DEV)致使的、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病。传达迅速,发病率和死亡率都很高,给中国养禽业形成巨大的经济损失。在病毒性肠炎的免疫预防工作中,接种了病毒性肠炎疫苗后,因为多种要素也许致使免疫不发生或发生低水平病毒性肠炎病毒抗体。
B蛋白是病毒的囊膜蛋白,具有吸附、穿入、交融细胞以及细胞间传达功用,具有杰出的反响原性及免疫原性,诱导机体发生高水平的体液和细胞免疫反响。本试剂盒选用酶联免疫吸附试验检查血清中抗病毒性肠炎病毒gB蛋白抗体IgG。用于免疫病毒性肠炎疫苗后的抗体动态水平监测,辅导免疫预防工作,评价病毒性肠炎免疫情况,也可用于该病的流行病学查询。
ELISA试剂盒试验过程
需求自备的器件;微量移液器,微量移液器配套运用的枪头,用来稀释洗涤液的500ml量筒,适用于检查96T微孔板的酶标仪,用于稀释样品的1.5ml Ep管,蒸馏水或去离子水。 样品的制备;用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释(建议:2μl血清样品参加198μl样品稀释液中),样品参加包被板前要充沛混匀,稀释不一样待检样品留意更换枪头。留意:①制备血清用的血液样本应无溶血景象发生;②不能稀释阴性、阳性对照。
操作过程;在A1和A2孔平分别参加100μl阴性对照;在A3和A4孔平分别参加100μl阳性对照;取100μl经1:100稀释好的待检样品参加相应孔中,并做好记载;37℃孵育1h;将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可运用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复5次,每次30s;加液时避免各孔间洗涤液串流影响检查成果,尽量将孔内洗涤液抛甩洁净;每孔加100μl酶标联系物;37℃孵育1h;重复过程3.5;每孔加100μl底物液;37℃孵育10min(避光显色);每孔加100μl的终止液;立刻于450nm波利益测定各孔的吸光度值,即OD450值。
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