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ELISA试剂盒检验方法详解
阅读次数:138发布时间:2017/9/27 9:11:06
ELISA试剂盒检验方法详解:
(1)使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
(2)取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
(3)空白对照孔加样品稀释液100μl,阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl,样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
(4)混匀,置37℃反应30分钟。
(5)扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
(6)每孔加酶标记物100μl(空白孔除外),置37℃反应30分钟。
(7)洗涤,同步骤5。
(8)每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
(9)每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
ELISA试剂盒实验加样须注意如下问题:
1、吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体,加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确。
2、不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确。
3、正确的加样方法应为45度,吸头贴着孔壁加入,应注意:
1)角度太小,会使液体残留在孔壁上,导致加样不准确。
2)吸头应当贴着管壁和液面的交界处。
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