丙酮酸羧化酶（PC）试剂盒（分光光度法 ）
货号：BC0730
规格：50 管/48 样
产品内容：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体47 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体×1 支，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存；
产品说明：
丙酮酸羧化酶（pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1）广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，
催化丙酮酸、ATP、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和Pi，是糖异生过程的个限速酶，在保证
血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
PC催化丙酮酸、ATP、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙
酸和NADH 生成苹果酸和NAD+，在340nm下测定NADH 氧化速率，即可反映PC 活性。
需自备的仪器和用品：
分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、 样本的前处理
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约0.1g 组织或收集500 万细菌或细胞，加入1mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g，4℃离心5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的PC（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10
秒，重复30 次），用于线粒体PC 活性测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；置于37℃（哺乳动物）
或25℃（其它物种）预热5 分钟；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四的配制：在试剂四瓶中加入2.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；
3、 在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本、50μL 试剂四和900μL 工作液，立即混匀，记录340nm 处
初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2，计算A=A1-A2。
注意：在该试剂盒中，若ΔA 大于0.5，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA 小于0.5 可
提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
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PC 活性计算：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PC（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷（V 样×Cpr） ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PC（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=1608×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
PC（U/10
4 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10
9]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=3.215×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1×10
-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10
3 L / mol /cm；d：比色皿
光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。