如何保证良好的色谱柱性能与色谱柱柱寿命｜怎样选择色谱柱填料粒度

 怎样选择填料粒度

目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um、5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

一、如何保证良好的柱性能与柱寿命

◆ 认证阅读色谱柱使用说明书；

◆ 使用填充良好的色谱柱；

◆ 尽量减少压力波动，避免机械及热冲击；

◆ 使用保护柱及在线过滤器；

◆ 经常以强溶剂冲洗色谱柱；

◆ 充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分；

◆ 用稳定的固定相（C18稳定）；

◆ 在中等PH值操作（6~8），用有机缓冲溶液；

◆ 色谱柱使用温度小于40℃；

◆ 硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0；

◆ 在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠；

◆ 流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%；

过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存（乙晴）。如何保证良好的色谱柱性能与色谱柱柱寿命｜怎样选择色谱柱填料粒度