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色谱柱使用过程中出现的问题及解决方法汇总（湖南创特）
阅读次数：258发布时间：2011/4/22 17:00:20
5 如何解决色谱柱使用过程中出现的问题 1.保留值与分离度重现性不好原因分析 问题 原因 表现 不同色谱柱间差异 填料、键合相不同 保留因子（k），分离因子（α） 使用期间柱变化 柱床破坏 柱效（N） 键合相丢失 保留因子（k），分离子（α） 硅胶基质溶解 柱效（N） 强保留分堆积堵塞 保留因子（k），柱效（N） 柱外效应 系统差异，进样量大、 柱效（N） 进样阀与 色谱柱之间、 色谱柱与检测器之间管 路太长、检测器流通池 体积大、接头死体积大 等。 分离效果变差 流动相组分改变 保留因子（k），柱效变化很小 流速改变 保留因子（k），分离因子（α） 温度改变 保留因子（k），柱效变化很小 柱平衡慢 重新平衡时间不够 保留因子（k），柱效变化很小 柱超载 样品量太大 保留因子（k），柱效（N）
2.造成色谱峰（不对称）拖尾的原因
1.色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；
2.柱头有污染；
3样品超载；
4样品溶剂不合适；
5.柱外效应；
6化学或二次保留（硅羟基）效应；
7缓冲容量不足或不合适；
8重金属污染。
3.如何解决峰形拖尾的问题
A．与化学有关的拖尾问题
1．流动相中，加入
知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3．降低进样量至<1ug。
B．与色谱柱有关的拖尾问题
1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲
醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。
2．使用保护柱
C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽
1．进样体积过大，（通常≤25uL）；
2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（佳连接管应<
3．检测器流通池的体积过大。
4．如何储存色谱柱
1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。
2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴）中，避免在缓冲溶液中保存。
3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。
4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。
．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。
色谱柱使用过程中出现的问题及解决方法汇总（湖南创特）
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