ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

    “兔子组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒”标本收集：　　

    1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。　　

    2.血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血，高血脂标本。　　

    3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。　　

    4.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃，-70℃电冰箱内，避免反复冻融，3-6月内检测。

二、间接法是检测抗体常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：

    (1)将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。

　　(2)加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。

　　(3)加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体问接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。

　　(4)加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。

　　本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。

三、“兔子组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒”特点

    1.一般有两种金标二抗，配Goat-anti-Rabbit和Goat-anti-Mouse抗体

    2.精细纯化并经过预吸附的抗体

    3.同rabbit 和mouse的单抗和多抗一起使用

    4.很低的背景

    5.电镜级别，非常适于电镜下的单标或者双标

    计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

四、实验前的准备

    1.要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

    2. “兔子组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒”实验时，要使底物避光保存。

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