各种类型ELISA测定时一般需经过这些步骤：固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果。

    1.重复某一样品时，加样时间尽可能与次接近。

    2.加样后在混匀器上充分混匀。

二、Elisa间接法、竞争法、捕获法，捕获法测IgM抗体

　　血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法，先将所有血清IgM(包括特异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：

　　(1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。

　　(2)加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。

　　(3)加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。

　　(4)加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤     (5)加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。

三、注意事项

    1.操作“兔子神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒”时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

    2.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

    3.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

四、ELISA操作技巧

    1.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

    2.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

    3.加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

    4.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

五、ELISA方法特点

    1.基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达，表达产物包含更多的抗原决定簇，可提高试剂盒的灵敏度，提高检出率。

2.分子量大：合成肽采用化学方法制备，由于工艺的局限，合成数量有限，只能达到数百个氨基酸。而利用基因工程制备的抗原，分子量更大。

如果您购买了“兔子神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒”之后没时间做实验，我公司可以安排专业的技术人员为您进行免费代检测。

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