各种类型ELISA测定时一般需经过这些步骤：固相包被→加待测样品→温育→洗涤+加酶标物→温育→洗涤→加底物→温育一加终止液→比色→判定结果。

    1.重复某一样品时，加样时间尽可能与次接近。

    2.加样后在混匀器上充分混匀。

二、ELISA常用的几种方法

1、双抗体夹心法测定抗原

将抗原免疫种动物获得的抗体吸附于固相表面;

加抗原，形成抗原-抗体复合物; 

加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;

加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体); 

加底物。底物的降解量＝抗原量。

2、直接法测定抗原 

将抗原吸附在载体表面；

加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；

加底物。底物的降解量＝抗原量。 

3、间接法测定抗体

将抗原吸附于固相载体表面；

加抗体, 形成抗原-抗体复合物；

加酶标抗体；

加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。

三、注意事项

    1.操作“兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒”时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

    2.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

    3.样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

四、ELISA操作技巧

    1.合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。

    2.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

    3.加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

    4.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

五、ELISA方法特点

    1.基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达，表达产物包含更多的抗原决定簇，可提高试剂盒的灵敏度，提高检出率。

2.分子量大：合成肽采用化学方法制备，由于工艺的局限，合成数量有限，只能达到数百个氨基酸。而利用基因工程制备的抗原，分子量更大。

如果您购买了“兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒”之后没时间做实验，我公司可以安排专业的技术人员为您进行免费代检测。

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