1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品10µl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

　　4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同 3。

　　8. 洗涤：操作同 5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

　　人MMP-2检测试剂盒操作注意事项

　　1. 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

　　2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

　　3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

　　4. 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

　　5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　6. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

　　7. 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

　　8. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

　　MMP-2检测试剂盒资料出处http://www.chem17.com/st277191