【视网膜微血管内皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【视网膜微血管内皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【视网膜微血管内皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【视网膜微血管内皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

979009    PyroMark Annealing Buffer (250 ml)    For annealing of sequencing primer to DNA template.  CNY                                  

62124     EZ1 DSP DNA Blood Kit (48)       CE-IVD Certified Kit for Extraction of DNA from human whole Blood. To be used in combination with EZ1 DSP Instrument (SAP 9001360) ａnd EZ1 DSP Blood Card (SAP 9017713). Available Input Volumes 350 µl, selectable elution volumes 200 µl. Processing time for 6 samples 25 Minutes.   CNY                                  

301709    HiPerFect Transfection Reagent (100 ml)            CNY                                  

9002199  RGQ 6plex, PC, PrioPLUS, no PM       "RGQ 6plex, PC Instrument

Installation of RGQ 2plex & Introductory training

Warranty extension to 3 yrs

Repair Center service, response 7-10 days

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No preventive Maintenance

Priority service provision over non-contract customers

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Unlimited number of repair service

All cost covered (Shipping, labor, parts)"     CNY                                  

9002196  RGQ 2plex HRM, PC, PrioPLUS, basic,no PM    "RGQ 2plex HRM, PC Instrument

Installation of RGQ 2plex HRM & Introductory training

Warranty extension to 3 yrs

Repair Center service, response 7-10

Loaner available in 2 days*

Preventive Maintenance (RRC,  1 PM per year)

Priority service provision over non-contract customers

Documented installation & PM report

Unlimited number of repair service

All cost covered (Shipping, labor, parts)"     CNY                                  

206546    Type-it HRM PCR Kit (2000)        CNY                                  

206541    Rotor-Gene Type-it HRM Discovery Kit              CNY                                  

9012731  Diluent Trough + lid PK 80 white         CNY                                  

9012721  syringe pump inlet tubing Plato 3100           CNY                                  

978803    PyroMark OneStep RT-PCR Kit (200)         CNY                                  

133231    NeXtalStock Sodium cacodyl. pH 6.8 (100)        CNY                                  

59445     EpiTect HRM PCR Kit (100)         CNY                            【视网膜微血管内皮细胞】      

381215    Investigator HDplex Kit (100)              CNY                                  

4863004  pg NDV Univ. RT-PCR ASSAY LE              CNY                                  

4873004  pg AIV-H5 RT-PCR ASSAY          CNY                                  

130923    NeXtal DWBlock Classics II Suite        CNY                                  

130920    NeXtal DWBlock JCSG+ Suite            CNY                                  

4621063  artus MTHFR LC PCR Kit (24) CE             CNY                                  

4841014  pg HPV PCR ASSAY            CNY                                  

4555265  artus M.tuberculosis RG PCR Kit (96) CE           CNY                                  

4551065  artus Borrelia LC PCR Kit (96) CE              CNY                                  

4513303  artus HI Virus-1 QS-RGQ Kit (24) RUO             CNY                                  

4510033  artus Enterovirus LC RT-PCR Kit (24) PRE         CNY                                  

130718    NeXtal Tubes PACT Suite            CNY                                  

122001    SeqTarget Primer Select (400)             CNY                                  

4506165  artus HBV TM PCR Kit (96) CE           CNY                                  

120016    QIAquick 96 Plates (24) Individual QIAquick 96 plates ａnd handbook. No buffers or reagents.       CNY                                  

75162     RNeasy Maxi Kit (12)    12 RNeasy Maxi Spin Columns, Collection Tubes (50 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers       CNY                            【视网膜微血管内皮细胞】      

74704     RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit (50)    50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), Proteinase K, RNase-free DNase I, RNase-free Reagents ａnd Buffers      CNY                                  

27406     QuickLyse Miniprep Kit (250)              CNY                                  

73504     RNeasy FFPE Kit (50)          CNY                                  

73442     RNeasy Plus Universal Tissue Midi Kit10            CNY                                  

72041     Oligotex Direct mRNA Midi/Maxi Kit    For 6 mRNA midi or 2 maxipreps: 1 ml Oligotex Suspension, Large Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers      CNY                                  

QYS-03279    土壤过氧化氢酶S-CAT测试盒   50管/24样     紫外分光光度法                        

QYS-03280    土壤硝酸还原酶S-NR测试盒     50管/24样     可见分光光度法                        

QYS-03281    土壤蔗糖酶S-SC测试盒     50管/24样     可见分光光度法                        

QYS-03282    土壤酸性磷酸酶S-ACP测试盒   50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03283    土壤中性磷酸酶S-NP测试盒     50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03284    土壤碱性磷酸酶S-AKP/ALP测试盒   50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03285    土壤汞S-Hg浓度测试盒     50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03286    土壤无机磷S-PHOS含量测试盒 50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03287    土壤总磷/有机磷/无机磷含量测试盒  50管/24样     可见分光光度法                        

QYS-03288    土壤脱氢酶SDHA测试盒    50管/24样     可见分光光度法                        

QYS-03289    H2S含量测试盒    50管/48样     可见分光光度法                         【视网膜微血管内皮细胞】

QYS-03290    NO含量测试盒     50管/24样     可见分光光度法                        

QYS-03291    NO含量测试盒     100管/48样   酶标法                        

QYS-03292    异柠檬酸裂解酶ICL测试盒       50管/48样     紫外分光光度法                        

QYS-03293    乙酸激酶ACK测试盒  50管/48样     紫外分光光度法                        

QYS-03294    单胺氧化酶测试盒       50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03295    单胺氧化酶测试盒       100管/96样   酶标法                        

QYS-03296    肌酸激酶测试盒    50管/48样     紫外分光光度法                        

QYS-03297    植物脱氢酶SDHA测试盒    50管/24样     可见分光光度法                        

QYS-03298    甜菜碱含量测定试剂盒       50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03299    双缩脲法蛋白含量测试盒    50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03300    双缩脲法蛋白含量测试盒    100管/96样   酶标法                        

QYS-03301    双缩脲法蛋白含量测试盒    100管/96样   可见分光光度法                        

QYS-03302    考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒    50管/48样     可见分光光度法                        

QYS-03303    考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒    100管/96样   可见分光光度法                        

QYS-03304    考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒    100管/96样   酶标法                        

QYS-03305    BCA蛋白法含量测试盒       50管/48样     可见分光光度法                         【视网膜微血管内皮细胞】

QYS-03306    BCA蛋白法含量测试盒       200管/198样 酶标法                        

QYS-03307    转氢酶-1 50管/48样     紫外分光光度法                        

QYS-03308    转氢酶-2 50管/48样     紫外分光光度法                        

QYS-03309    人胚层检测试剂盒       HumanGermLayerDetectionKit      50reactions     上海中乔新舟13816636051sciencell-细胞