【肺癌组织源性原代细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【肺癌组织源性原代细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【肺癌组织源性原代细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【肺癌组织源性原代细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

180455    GeneRead DNA Library I Amp Kit (100)             CNY                                  

159205    QIAcard FTA Four Spots (100)           CNY                                  

159203    QIAcard FTA Two Spots (100)            CNY                                  

159112    QIAsafe DNA 96-Well Plates (10)        CNY                                  

158920    Puregene Proteinase K (5 ml)        CNY                                  

158914    DNA Hydration Solution (100 ml)         CNY                                  

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34660     Penta·His Antibody, BSA-free (100 µg) 100 ug mouse anti-(H)5 (lyophilized, BSA-free, for 1000 ml working solution)       CNY                                  

34362     TAGZyme DAPase Enzyme (2,5U)       For processing of approximately 50 mg tagged protein: 2.5 units DAPase Enzyme, 20 mM Cysteamine-HCl (1 ml)     CNY                                  

30991     Glutathione HiCap Cartridges (5 x 5 ml)              CNY                                  

30450     Ni-NTA Superflow (500 ml)  500 ml nickel-charged resin (max. pressure: 140 psi)  CNY                                  

9011533  Zdrive unit, BR8000              CNY                                  

9013182  Tubing, pressure relief valve outlet, DI        CNY                                  

9243539  HC2, PM Service   The Preventive Maintenance (PM) service ensures the correct operation of the equipment. During the PM, all the instrument modules are inspected by a qualified QIAGEN service technician. The Preventive Maintenance is performed under the manufacturer guidelines ａnd documented according to GLP / GMP   CNY                                  

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9018898  Rotor-Disc Heat Sealer 110V        CNY                                  

9018707  EZ1 Adv. XL Virus Card v1.1        CNY                                  

9018568  Card slot, EZ1a             CNY                                  

9012987  Thermostate system, complete, (100-120V)        CNY                            【肺癌组织源性原代细胞】      

670723    ipsogen BCR-ABL1 Mbcr IS-MMR Kit (24) CE          CNY                                  

670391    ipsogen BCR-ABL1 Mbcr Standards            CNY                                  

389003    Investigator IDproof Server Key          CNY                                  

387116    Investigator Quantiplex HYres Kit (200)              CNY                                  

386015    DNA Size Standard 550 (BTO) (100)           CNY                                  

381545    Investigator ESSplex SE Plus Kit (100)        CNY                                  

338912    Return Sample Fee        CNY                                  

381317    Investigator Nonaplex ESS Kit (400)           CNY                                  

QY-G269 绿猴肾细胞    Vero       上皮细胞       贴壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G270 转化的非洲绿猴肾细胞       COS-7 SV40  成纤维细胞    贴壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G271 狗肾细胞       MDCK  上皮细胞       贴壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G272 猪动脉内皮细胞    PIEC      上皮细胞       贴壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G273 猪干细胞       MSCs     上皮细胞       贴壁       DMEM（低糖）    胎牛血清      

QY-G274 人肾上皮细胞       HK-2       上皮细胞       贴壁       DMEM/F12    胎牛血清      

QYC01    盐酸克伦特罗(瘦肉精）快速检测卡  20T/盒    各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QYC02    莱克多巴胺快速检测卡       20T/盒    各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QYC03    沙丁胺醇快速检测卡    20T/盒    各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QYC04    β-兴奋剂快速检测卡  20T/盒    各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                        

QYC05    三聚氰胺快速检测卡    20T/盒    水产、牛奶、奶粉                           

QYC06    孔雀石绿快速检测卡    20T/盒    水产、饲料等                            【肺癌组织源性原代细胞】

QYC07    呋喃唑酮代谢物快速检测卡       20T/盒    水产、饲料等                           

QYC08    呋喃它酮代谢物快速检测卡       20T/盒    水产、饲料等                           

QYC09    呋喃妥因代谢物快速检测卡       20T/盒    水产、饲料等                           

QYC10    呋喃西林代谢物快速检测卡       20T/盒    水产、饲料等                           

QYC11    氯霉素快速检测卡       20T/盒    水产、蜂蜜、牛奶、奶粉                        

QYC12    磺胺类多残留快速检测卡    20T/盒    蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC13    阿维菌素、伊维菌素快速检测卡       20T/盒    蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC14    氟喹诺酮类快速检测卡       20T/盒    蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC15    己烯雌酚快速检测卡    20T/盒    水产、蜂蜜、饲料等                        

QYC16    氟喹诺酮总量检测卡    20T/盒    水产、蜂蜜、饲料等                        

QYC17    磺胺类多残留检测卡    20T/盒    水产、蜂蜜、饲料等                        

QYC18    黄曲霉毒素B1快速检测卡        20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC19    黄曲霉毒素M1快速检测卡       20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC20    青霉素快速检测试纸卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC21    β内酰胺类快速检测试纸卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC22    红霉素快速检测试纸卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                            【肺癌组织源性原代细胞】

QYC23    新霉素快速检测试纸卡      20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC24    头孢噻呋快速检测试纸卡   20T/盒    谷物、牛奶、奶粉                           

QYC201  猪瘟抗体检测卡    20T/盒    抗血清检测诊断