【气管平滑肌细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【气管平滑肌细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【气管平滑肌细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【气管平滑肌细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

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9018697  EZ1 Adv. XL DNA Buffy Coat Card             CNY                                  

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130928    Nextal DWB CubicPhase I Suite           CNY                                  

381527    Investigator ESSplex SE Kit (400)        CNY                                  

381535    Investigator® ESSplex Plus Kit (100)          CNY                                  

380617    Investigator Hexaplex ESS Kit (400)            CNY                                  

9001531  QIAgility System (incl. Laptop)            CNY                            【气管平滑肌细胞】   

9001526  PyroMark Q96 MD       For performing pyrosequncing reaction on the Q96 MD     CNY                                  

130926    NeXtal DWBlock JCSG Core III Suite         CNY                                  

4885004  pg AIV-H7 RT-PCR ASSAY LE            CNY                                  

130921    NeXtal DWBlock Opti Salt Suite   Contains 96 x 0.5 ml of each OptiSalt solution     CNY                                  

4835024  careCT PCR ASSAY V2        CNY                                  

4556065  artus Mycobac. diff. LC PCR Kit (96) CE           CNY                                  

4555065  artus M.tuberculosis LC PCR Kit (96) CE           CNY                                  

130807    NeXtal CubicPhase Kit          CNY                                  

130709    NeXtal Tubes pHClear Suite         CNY                                  

130704    NeXtal Tubes PEGs Suite             CNY                                  

129117    Nuclease-Free Water (5 Liter)              CNY                                  

76506     RNAprotect Bacteria Reagent (2x100ml)      RNAprotect Bacteria Reagent (2 x 100 ml)   CNY                                  

74881     RNeasy 96 Universal Tissue Kit (4)             CNY                                  

74204     RNeasy MinElute Cleanup Kit (50)       50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers     CNY                                  

27291     QIAprep 96 Plus Miniprep Kit (4)         CNY                                  

PN522003      磺胺甲噁唑检测试剂盒       Sulfamethoxazole ELISA Test Kit  96T 美国ABRaxis              

PN5111SB      链霉素检测试剂盒       Streptomycin ELISA Test Kit 96T 美国ABRaxis              

PN515106      苏丹红检测试剂盒       Sudan red ELISA Test Kit      96T 美国ABRaxis               【气管平滑肌细胞】

PN52254BA    四环素检测试剂盒       Tetracycline (TET) ELISA Test Kit       96T 美国ABRaxis              

PN900TES     睾酮检测试剂盒    Testosterone ELISA Test Kit  96T 美国ABRaxis              

PN52252R      群勃龙检测试剂盒       trenbolone ELISA Test Kit     96T 美国ABRaxis              

PN52256B      泰乐菌素检测试剂盒    Tylosin ELISA Test Kit   96T 美国ABRaxis              

PN590001      乙氧基化物检测试剂盒       Ethoxylate ELISA Test Kit     96T 美国ABRaxis              

PN520041      烷基酚检测试剂盒       Alkylphenol ELISA Test Kit   96T 美国ABRaxis              

PN520031      直链烷基酚检测试剂盒       Linear alkyl phenol ELISA Test Kit       96T 美国ABRaxis              

PN54003B      2,4-D检测试剂盒  2,4-D ELISA Test Kit     96T 美国ABRaxis              

PN500021      乙草胺检测试剂盒       Acetochlor ELISA Test Kit    96T 美国ABRaxis              

PN500076      甲草胺检测试剂盒       Alachlor ELISA Test Kit 96T 美国ABRaxis              

PN520005      阿特拉津检测试剂盒    Atrazine ELISA Test Kit 96T 美国ABRaxis              

PN500701      嘧菌酯检测试剂盒       Azoxystrobin ELISA Test Kit 96T 美国ABRaxis              

PN520006      三嗪代谢物检测试剂盒       Triazine Metabolite (DACT) ELISA Test Kit 96T 美国ABRaxis              

PN500800      吡虫啉检测试剂盒       Imidacloprid ELISA Test Kit  96T 美国ABRaxis              

PN54002B      多菌灵/苯菌灵检测试剂盒   Carbendazim/Benomyl ELISA Test Kit  96T 美国ABRaxis              

PN540021      环戊二烯类(硫丹)检测试剂盒     Cyclodienes ELISA Test Kit   96T 美国ABRaxis               【气管平滑肌细胞】

PN540041      DDE/DDT检测试剂盒  DDT/DDE ELISA Test Kit     96T 美国ABRaxis              

PN520001      敌草隆检测试剂盒       Diuron ELISA Test Kit   96T 美国ABRaxis              

PN500511      氟啶草酮检测试剂盒    Fluridone ELISA Test Kit       100T       美国ABRaxis              

PN500086      草甘膦检测试剂盒       Glyphosate ELISA Test Kit    96T 美国ABRaxis              

PN500065      异丙甲草胺检测试剂盒       Metolachlor ELISA Test Kit   96T 美国ABRaxis              

PN550055      有机磷酸酯检测试剂盒       Organophosphorus ester/Carbamate (OP/C) ELISA Test Kit       96T 美国ABRaxis              

PN500501      五氟磺草胺检测试剂盒       Penoxsulam ELISA Test Kit   96T 美国ABRaxis              

PN500705      吡唑醚菌酯检测试剂盒       Pyraclostrobine ELISA Test Kit     96T 美国ABRaxis              

PN500201      拟除虫菊酯检测试剂盒       Pyrethroids ELISA Test Kit    96T 美国ABRaxis              

PN500601      氟乐灵检测试剂盒       Trifluralin ELISA Test Kit      96T 美国ABRaxis              

PN541000      大肠杆菌 O26检测试剂盒  E.coli O26 ELISA Test Kit     50T 美国ABRaxis              

PN541010      大肠杆菌 O45检测试剂盒  E.coli O45 ELISA Test Kit     50T 美国ABRaxis