【心室肌细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【心室肌细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【心室肌细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【心室肌细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

207045    QuantiTect Whole Transcriptome Kit (100)         CNY                                  

9012744  Peristaltic Pump outlet tubing 1.25 m           CNY                                  

59930     #EpiTect MethyLight Assay Hs-PITX2 (100)       "10-fold primer TaqMan probe mix, for real-time MethyLight PCR

For TaqMan probe-based real-time quantification of methylated or unmethylated CpG sites"    CNY                                  

59655     EpiTect Control DNA, methylated (100)              CNY                                  

9012729  Syringe pump outlet tubing for Plato            CNY                                  

9012727  Syringe pump inlet tubing 3002            CNY                                  

978801    PyroMark OneStep RT-PCR Kit (50)           CNY                                  

978703    PyroMark PCR Kit (200)              CNY                                  

9012715  Troughs, 80ml (100 troughs + lids)             CNY                                  

133241    NeXtalStock Sodium malate pH 7.0 (200)           CNY                                  

133232    NeXtalStock Sodium cacodyl. pH 7.0 (100)        CNY                                  

57414     QIAamp MinElute Media Kit (50)         CNY                                  

973043    PyroMark Q96 CpG LINE-1 (192)       For quantification of global methylation level in transposable elements       CNY                                  

972812    PyroMark Gold Q96 SQA Reagents (1 x 96)       "For performing pyrosequencing reaction on the Q96 ID (1x96) 

SQA= Sequencing Analysis"  CNY                                  

972432    PyroMark Q96 SNP MTHFR (96) For detection of variants in MTHFR gene     CNY                                  

133223    NeXtalStock Sodium ac. pH 4.2 (200)         CNY                            【心室肌细胞】   

133216    NeXtalStock MOPS pH 6.5 (200)        CNY                                  

9002032  Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM Platform            CNY                                  

9002028  Rotor-Gene Q MDx 5plex, Priority       Rotor-Gene Q 6plex (w/o PC) Priority includes the Rotor-Gene Q system, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with on site introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years with shipment to Repair Center Service has response turnaround time (repair) 7-10 days. One preventive maintenance visit is included for each year of the warranty; 2 preventive maintenance visits in total. Replacement system (Loaner) provision included (provision time 2-3 days) with transportation cost coverage. The service package includes all parts, labor ａnd travel costs with installation performance ａnd service visits documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents. CNY                                  

9002023  Rotor-Gene Q MDx 5plex System        CNY                                  

9002021  Rotor-Gene Q MDx 5Plex no PC         CNY                                  

970042    PyroMark Q24 CpG LINE-1 (4 x 24)   For quantification of global methylation level in transposable elements       CNY                                  

133206    NeXtalStock Potassium formate (200)         CNY                                  

929523    QX Alignment Marker 15 bp/10 kb (1.5 ml)        CNY                                  

929500    QX Intensity Calibration Marker (1.0 ml)            CNY                                  

9012623  Pippeting Station, 3 microtitre plates            CNY                                  

291073    mericon Mon 810 Corn (24)         CNY                                  

9001917  PyroMark Q96 MD, Priority  PyroMark Q96 MD, Priority includes the PyroMark Q96 MD instrument, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 2 years. One preventive maintenance visit is included for each year of the warranty; 2 preventive maintenance visits in total. Service package includes all parts, labor ａnd travel costs with a service response time of 48 hours (2 working days). Performance of the installation ａnd service visits are documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents.       CNY                                  

133113    NeXtalStock Sodium Iodide (200)        CNY                                  

967152    RNeasy 96 BioRobot 8000 Kit (12)       For 12 x 96 total ａnd cytoplasmic RNA preps on the BioRobot 8000: 12 RNeasy 96 Plates, Elution Microtubes CL (1.2 ml), Caps, Square-Well Blocks, RNase-free Reagents ａnd Buffers     CNY                                  

9018464  Printer, EZ1a          CNY                                  

9018543  Anti-corrosion oil (rotor), QIAC           CNY                            【心室肌细胞】   

9018466  Transport Box, EZ1 Advanced             CNY                                  

QYD745  己烯雌酚快速检测试剂盒    96T/盒    0.02 30min-30min-15min      尿样/组织/饲料           

QYD746  地塞米松快速检测试剂盒    96T/盒    0.1ppb    30min-30min-15min      禽类组织、饲料          

QYD747  三聚氰胺快速检测试剂盒    96T/盒    1ppb       30min-15min  乳制品、动物组织、饲料、水产             

QYD748  呋喃西林快速检测卡    50T/盒    1ppb       5-8min    组织、水产、蜂蜜             

QYD749  呋喃妥因快速检测卡    50T/盒    1ppb       5-8min    组织、水产、蜂蜜              【心室肌细胞】

QYD750  呋喃唑酮快速检测卡    50T/盒    0.5ppb    5-8min    组织、水产、蜂蜜             

QYD751  呋喃它酮快速检测卡    50T/盒    0.5ppb    5-8min    组织、水产、蜂蜜             

QYD752  氯霉素快速检测试剂盒       96T/盒    0.05ppb   30min-30min-15min      组织、水产、蜂蜜       饲料兽药监察所（畜牧产品安全检测中心）、农产品质量安全检测中心、水产研究所检测中心、水产市场质量安全检测中心、出入境检验检疫局等   

QYD753  恩诺沙星快速检测试剂盒    96T/盒    0.1ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD754  环丙沙星快速检测试剂盒    96T/盒    0.1ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD755  喹诺酮类（QNS）快速检测试剂盒    96T/盒    0.1ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD756  磺胺多残留快速检测试剂盒       96T/盒    0.5ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD757  磺胺十五合一快速检测试剂盒    96T/盒    0.5ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD758  磺胺七合一快速检测试剂盒       96T/盒    0.5ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD759  磺胺三合一检测试剂盒       96T/盒    0.2ppb    45min-15min  动物、水产组织、蜂蜜             

QYD760  四环素快速检测试剂盒       96T/盒    0.05ppb   30min-30min-15min      禽类、水产组织、牛奶             

QYD761  链霉素快速检测试剂盒       96T/盒    0.1ppb    30min-30min-15min      肌肉组织、蜂蜜          

QYD762  喹诺酮快速检测卡       50T/盒    2ppb       5-8min    组织、水产、蜂蜜             

QYD763  磺胺类快速检测卡       50T/盒    20ppb     5-8min    组织、蜂蜜、牛奶、尿液、血清             

QYD764  氯霉素检测卡       50T/盒    0.1ppb    5-8min    蜂蜜、水产、组织             

QYD765  黄曲霉B1快速检测试剂盒  96T/盒    0.02ppb/0.01ppb    30min-15min  谷物、饲料、牛奶       饲料兽药监察所（畜牧产品安全检测中心）、农产品质量安全检测中心 【心室肌细胞】

QYD766  玉米赤霉烯酮快速检测试剂盒    96T/盒    0.3ppb    30min-15min  谷物、饲料、牛奶             

QYD767  黄曲霉M1快速检测试剂盒 96T/盒    0.5ppb    30min-15min  谷物、饲料、牛奶             

QYD768  黄曲霉总量快速检测试剂盒       96T/盒    0.1ppb/0.02ppb      30min-15min  谷物、饲料          

QYD769  伏马毒素快速检测试剂盒    96T/盒    0.5ppb    30min-15min  谷物、饲料          

QYD770  赭曲霉毒素A检测试剂盒   96T/盒    0.1   30min-15min  粮食作物（玉米、大米、豆类、花生、麦类等）、、饲料等        

QYD771  伏马菌素B1检测试剂盒     96T/盒    10    30min-15min  粮食作物（玉米、大米、豆类、花生、麦类等）、饲料等         

QYD772  伏马菌素B1检测试剂盒     96T/盒    100  30min-15min  牛奶、奶粉、炼乳等          

QYD773  呕吐毒素快速检测试剂盒    96T/盒    3ppb       30min-30min-15min      谷物、饲料          

QYD774  黄曲霉B1快速检测卡  50T/盒    1ppb/2ppb/3ppb     5-8min    谷物、饲料、牛奶             

QYD775  玉米赤霉烯酮快速检测卡    50T/盒    10ppb/30ppb   5-8min    谷物、饲料、牛奶