【脐静脉平滑肌细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【脐静脉平滑肌细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【脐静脉平滑肌细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【脐静脉平滑肌细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9018162  PCB, connect, touch screen, Qsym             CNY                                  

9018123  Tool, cable, FIW ｕpdate centrifuge, QIAC          CNY                                  

9018089  Cooling adapter, Reagent holder 2, Qsym            CNY                                  

9017854  Shaker Rack Plugs (12)        CNY                                  

9017847  Shaker Rack          CNY                                  

9017801  Body, back panel, QIAC        CNY                                  

9015070  EX.UNIT, Dilutor, BR3000 (9170)              CNY                                  

9015016  Probe 0.4mm, BR8 RD         CNY                                  

950163    Final Wash Reagent (DXF) (350 ml)            CNY                                  

950067    QIAcube HT Plasticware              CNY                                  

218600    miScript Precursor Assay (100)    Primer Assays for the detection of precursor miRNAs. Each assay will be a mix of a forward ａnd a reverse stem loop specific primer for a specific precursor miRNA.    CNY                            【脐静脉平滑肌细胞】      

218421    Human miScript Assay 96 SetVXX.X (20)          CNY                                  

9018304  EZ1 Advanced Virus Card v1.1            CNY                                  

9239547  Flag, X Stop, XY          CNY                                  

9015303  Stopper, reagent tub, left, M48             CNY                                  

9015293  Plate, magnet, M48        CNY                                  

1031240  REPLI-g Midi-Reacti.Buffer(730µl/2),KG           CNY                                  

1030058  BioSprint 15 Plasticware       26x 5-rod covers ａnd 130 x 5-tube strips for the use with BioSprint 15     CNY                                  

1027420  Premix FlexiTube siRNA              CNY                                  

9019455  Upgrade kit GD100, incl. Perm/Remove, HS              CNY                                  

9019901  Lead Screw - X, PyroQ96ID        CNY                                  

9018174  2D-Barcode reader, Qsym            CNY                                  

9018170  Worktable, body parts, Qsym              CNY                                  

9018128  Motor, z, extractor, Qsym            CNY                                  

9018093  Cooling adapter, LC capillaries 32, Qsym            CNY                                  

9017838  Rotor Key              CNY                                  

9017810  Module, centrifuge, QIAC            CNY                            【脐静脉平滑肌细胞】      

9017802  Body, side panel, left, QIAC          CNY                                  

9017790  Belt, Y-drive, QIAC        CNY                                  

9015281  Plate, Z side, right, M48        CNY                                  

9015214  Z-Module 0.4mm Probe, BR8 RD        CNY                                  

9015187  Reagent Holders, small, M96 (10)        CNY                                  

9015182  Tip Guard, M48            CNY                                  

QYHP005       小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒                          96孔板X2                                

QYHP006       半抗原偶联试剂盒（EDC法，500MG载体蛋白量）                     盒                                    

QYHP007       HRP抗体标记试剂盒   （优化高碘酸钠氧化法）                                           盒                                        

QYH01    醛固酮检测试剂盒（血清或尿液）    Aldosterone    96孔/盒                      

QYH02    5α－雄甾－3α，17β－二醇葡萄糖醛苷酸检测试剂盒（血清）       5a-Androstane-3a, 17b diol Glucuronide (3a-Diol G)   96孔/盒                      

QYH03    雄烯二酮检测试剂盒（血清）    Androstenedione     96孔/盒                      

QYH04    雄烯二酮（唾液）检测试剂盒（血清）    Androstenedione Saliva  96孔/盒                      

QYH05    抗甲状腺过氧化物酶自身抗体（Anti-TPO）检测试剂盒（血清）       Anti-Thyroid Peroxidase Autoantibodies (Anti-TPO)     96孔/盒                      

QYH06    抗甲状腺球蛋白自身抗体（Anti-TG）检测试剂盒（血清）  Anti-Thyroglobulin Autoantibodies (Anti-TG)       96孔/盒                           

QYH07    β2微球蛋白（β2M）检测试剂盒（血清）   B2Microglobulin     96孔/盒                       【脐静脉平滑肌细胞】

QYH08    C肽检测试剂盒（血清）    C-Peptide       96孔/盒                      

QYH09    C反应蛋白（hs-CRP）检测试剂盒（血清）    C-Reactive Protein (hs-CRP) 96孔/盒                      

QYH10    癌胚抗原（CEA）检测试剂盒（血清）    Carcinoembryonic Antigen (CEA)  96孔/盒                      

QYH11    皮质醇检测试剂盒（血清）       Cortisol   96孔/盒                      

QYH12    皮质醇（唾液）检测试剂盒       Cortisol Saliva 96孔/盒                      

QYH13    绒毛膜促性腺激素（hCG）检测试剂盒（血清）    Chorionic Gonadotropin (hCG)     96孔/盒                      

QYH14    脱氢表雄酮硫酸盐（硫酸脱氢表雄酮）（DHEAS）检测试剂盒（血清）     Dehydroepiandrosterone Sulfate (DHEAS)       96孔/盒                      

QYH15    二氢睾酮（双氢睾酮）（DHT）检测试剂盒（血清）     Dihydrotestosterone (DHT)   96孔/盒                      

QYH16    雌二醇检测试剂盒（血清）       Estradiol  96孔/盒                      

QYH17    雌酮检测试剂盒（血清）    Estrone   96孔/盒                      

QYH18    铁蛋白检测试剂盒（血清）       Ferritin    96孔/盒                      

QYH19    卵泡刺激素（hFSH）检测试剂盒（血清）      Follicle Stimulating Hormone (hFSH)    96孔/盒                      

QYH20    生长激素（hGH）检测试剂盒（血清）    Growth Hormone (hGH)       96孔/盒                      

QYH21    胰岛素样生长因子结合蛋白1（IGFBP-1）检测试剂盒（血清）  Insulin-Like Growth Factor Binding Protein-1 (IGFBP-1)      96孔/盒                      

QYH22    促黄体生成素（hLH）检测试剂盒（血清）     Luteinizing Hormone (hLH)   96孔/盒                      

QYH23    瘦素检测试剂盒（血清）    Leptin     96孔/盒                       【脐静脉平滑肌细胞】

QYH24    卵巢癌（CA125）检测试剂盒（血清）    Ovarian Cancer (CA125)       96孔/盒                      

QYH25    孕烯醇酮检测试剂盒（血清）    Pregnenolone  96孔/盒                      

QYH26    孕酮检测试剂盒（血清）    Progesterone   96孔/盒                      

QYH27    孕酮（唾液）检测试剂盒    Progesterone Saliva       96孔/盒                      

QYH28    催乳素检测试剂盒（血清）       Prolactin  96孔/盒