【输尿管上皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【输尿管上皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【输尿管上皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【输尿管上皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9013201  Tubing,release val.auto vac,BR8000 v1.00          CNY                                  

9011704  Cable, PCON98 to AC-box (L1), BR8000            CNY                                  

132603    NeXtal Stock Propylene glycol (50)      100% v/v Propylene glycol - 50mL (4 x 12,5 ml tube) CNY                                  

800302    Heterozygote detection, manual            CNY                                  

132539    NeXtal Stock di-Potassium phosphate (50)   3M di-Potassium hydrogen phosphate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)       CNY                                  

132530    NeXtal Stock Cesium sulfate (50) 1M Cesium sulfate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)      CNY                                  

337842    qBiomarker SYBR ROX FAST Mastermix (12)           CNY                                  

679923    ipsogen RT Kit (33) CE         CNY                                  

180432    GeneRead DNA Library I Core Kit (12)        CNY                                  

159332    Harris UNI-CORE 6.00 mm Punch Kit (4)          CNY                                  

159134    QIAsafe DNA Blood Tubes (50)           CNY                                  

158567    Gentra Puregene Yeast/Bact. Kit (200 ml)            CNY                                  

33213     Xa Removal Resin (2 x 5ml)  2 x 2.5 ml Xa Removal Resin, 3 x 1.9 ml 1 M Tris-Cl, pH 8.0    CNY                            【输尿管上皮细胞】   

33203     pQE-30Xa Vector DNA  25 ug pQE-30 Xa Vector DNA      CNY                                  

32915     N-Terminus pQE Vector Set  25 ug each: pQE-9, pQE-30, pQE-31, pQE-32, pQE-40      CNY                                  

31314     Ni-NTA Spin Kit (50)     50 Ni-NTA Spin Columns, Reagents, Buffers, Collection Tubes, 1 ug Control Expression Plasmid       CNY                                  

30950     Glutathione HiCap Matrix  (500 ml)            CNY                                  

30721     Ni-NTA Superflow Cartridges (5x1 ml)        CNY                                  

30230     Ni-NTA Agarose (100 ml)      100 ml nickel-charged resin (max. pressure: 2.8 psi)   CNY                                  

9021219  # LED, 6 µA (12), QX          CNY                                  

9011667  Side panel, technical tower, BR8000            CNY                                  

9240707  Suction Cup Kit, AP              CNY                                  

9240998  QIArent&go - Rent out fee LiquiChip          CNY                                  

676613    ipsogen BAALC ProfileQuant Kit (24)          CNY                                  

676191    ipsogen CBFB-MYH11 D Standards             CNY                                  

9011352  SamTrak positive sample identification         CNY                                  

9011268  Pump, Syringe, Plato 3xxx, (9194)              CNY                                  

330524    RT²  SYBR Green ROX qPCR Mastermix (6)            CNY                                  

871001    KRAS PCR Kit (25)              CNY                            【输尿管上皮细胞】   

9011266  Syringe Pump Plato 3000 (7135)          CNY                                  

9011216  AC box, BR8000           CNY                                  

9011119   Valve, 3-way, dilutor, BR8000              CNY                                  

9010979  Plate Turntable Olympus PK80 (inc. brd.)           CNY                                  

QTR-1043      全系列大肠杆菌免疫血清OK     G205      1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1044      全系列大肠杆菌免疫血清OK     E65  1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1045      全系列大肠杆菌免疫血清OK     E57  1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1046      全系列大肠杆菌免疫血清OK     E6811     1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1047      全系列大肠杆菌免疫血清OK     E145       1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1048      全系列大肠杆菌免疫血清OK     G1253     1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1049      全系列大肠杆菌免疫血清OK     Abbotstown    1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1050      全系列大肠杆菌免疫血清OK     P16  1ml  玻片凝集试验                     【输尿管上皮细胞】

QTR-1051      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V142       1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1052      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V189       1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1053      全系列大肠杆菌免疫血清OK     E4   1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1054      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V17 1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1055      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V50 1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1056      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V79 1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1057      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V165       1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1058      全系列大肠杆菌免疫血清OK     V113       1ml  玻片凝集试验                    

QTR-1059      全系列大肠杆菌免疫血清K91    1ml  玻片凝集试验                           

QTR-1060      全系列大肠杆菌免疫血清K89    1ml  玻片凝集试验                           

QTR-1061      全系列大肠杆菌免疫血清K103  1ml  玻片凝集试验                           

QTR-1062      全系列大肠杆菌免疫血清K87    1ml  玻片凝集试验                           

QTR-1063      肠产毒性大肠杆菌诊断试剂盒    60    乳胶凝集试验                           

QTR-1064      肠产毒性大肠杆菌诊断试剂盒    60    乳胶凝集试验                           

QTR-1065      肠产毒性大肠杆菌诊断试剂盒    60    乳胶凝集试验                           

QTR-1066      肠产毒性大肠杆菌诊断试剂盒    60    乳胶凝集试验                            【输尿管上皮细胞】

QTR-1067      禽流感病毒H5N3分型抗原 1ml  血凝试验/凝集抑制试验                          

QTR-1068      禽流感病毒H5N1分型抗原 1ml  血凝试验/凝集抑制试验                          

QTR-1069      禽流感病毒H5N2分型抗原 1ml  血凝试验/凝集抑制试验                          

QTR-1070      禽流感病毒H7N2分型抗原 1ml  血凝试验/凝集抑制试验                          

QTR-1071      禽流感病毒H7N7分型抗原 1ml  血凝试验/凝集抑制试验                          

QTR-1072      禽流感病毒H5N1分型血清 0.5ml      血凝试验/凝集抑制试验                          

QTR-1073      禽流感病毒H5N2分型血清 0.5ml      血凝试验/凝集抑制试验