【胎盘羊膜细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【胎盘羊膜细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【胎盘羊膜细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【胎盘羊膜细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

67563     MagAttract HMW DNA Kit (48)           CNY                                  

63183     DyeEx 96 Kit (24)  24 DyeEx 96 Plates; 4 Collection Plates, 48-Well  CNY                                  

9012750  Syringe pump outlet tubing (5.7 m)             CNY                                  

9010347  Cable, flat, 342mm, Z1-PCB to Z2-PCB              CNY                                  

9010292  X-Abdeckung oben P3xx1 (9194)        CNY                                  

311812    BioMag Protein G (10 ml)     BioMag Protein G suspension (5 mg/ml)      CNY                                  

59844     EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit (50)            CNY                                  

9001810  HC2 Laser Printer, 220V              CNY                                  

206403    QIAGEN LongRange PCR Kit (250)     For 250 PCR rxns a 50 µl: Enzyme Mix (Taq ａnd Proofreading Enzyme, (5 u/µl), 10 x PCR Buffer for increased fidelity (contains dNTP´s),  25 mM MgCl2, 5 x Q-Solution CNY                            【胎盘羊膜细胞】      

9012732  Plate stacker (dark) 4 plates          CNY                                  

9012724  Syrinbe pump inlet tubing for Plato              CNY                                  

979004    PyroMark Q96 Cartridge (3)  For delivery of nucleotides ａnd reagents for use in PyroMark Q96 ID.      CNY                                  

979002    PyroMark Q96 Plate Low (100)    For sample analysis of DNA template on ID.       CNY                                  

9012711  Syringe pump outlet tubing Plato 3000         CNY                                  

133234    NeXtalStock Sodium citrate pH 3.5 (200)           CNY                                  

133228    NeXtalStock Sodium cacodyl. pH 6.2 (100)        CNY                                  

9002125  QIAxcel Advanced, PrioPLUS       "QIAxcel Advanced Instrument

Installation of QIAxcel Advanced & Introductory training

Warranty extension to 3 yrs

Repair Center service, response 7-10

Loaner available in 2 days*

Preventive Maintenances(1 onsite or RRC,  1 PM per year)

Priority service provision over non-contract customers

Documented installation & PM report

Unlimited number of repair service

All cost covered (travel, labor, parts)"   CNY                                  

9002122  Priority HybridCapture2, Core 240V, APAC         CNY                                  

9002041  Rotor-Gene Q MDx 6Plex no PC         CNY                                  

972052    PyroMark Q96 CpG Prader Willi (96)   For quantification of methylation level in  Prader-Willi ａnd Angelman Syndromes       CNY                                  

971530    therascreen® NRAS Pyro Kit (24) CE         CNY                                  

301109    PolyFect Transfection Reagent (10x100ml)         CNY                                  

301007    Attractene Transfection Reagent (4x1 ml)           CNY                                  

52906     QIAamp Viral RNA Mini Kit (250) For 250 RNA preps: 250 QIAamp Mini Spin Columns, Carrier RNA, Collection Tubes (2 ml), RNase-free Buffers CNY                                  

9012683  Pump, Peri4., inlc. Front (A04897)+Cable           CNY                            【胎盘羊膜细胞】      

9012664  Tubing, syringe to probe, 90/120   v1.00          CNY                                  

9002009  Rotor-Gene Q MDx 2plex, PrioPLUS   "Rotor-Gene Instrument

Installation of Rotor-Gene & Introductory training

Warranty extension to 3 yrs

Regional Repair Center service, 7-10 day turn around time

Loaner available in 2 days*

Annual Inspections (1 PM per year)

Priority service provision over non-contract customers

Documented installation & PM report

Unlimited number of repair service

All cost covered (travel, labor, parts)"   CNY                                  

133212    NeXtalStock MIB pH 10.0 (200)          CNY                                  

292145    mericon Horse Kit (96)         CNY                                  

292053    mericon Goat Kit (24)           CNY                                  

929522    QX Alignment Marker 15 bp/3 kb (1.5 ml)          CNY                                  

9012636  Vacuum manifold unit, with valve, BR3000   This is the base plate on the instrument for the vacuum manifold ａnd it includes the valves at the bottom CNY                                  

291075    mericon Mon 810 Corn (96)         CNY                                  

QTR-1170      猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型荧光RT-PCR检测试剂盒    48                               

QTR-1171      戊型肝炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒    48                               

QTR-1172      鲤春病荧光RT-PCR检测试剂盒 48                               

QTR-1173      狂犬病病毒荧光RT-PCR检测试剂盒 48                               

QTR-1174      传染性造血器官坏死病病毒RT-PCR检测试剂盒    48                               

QTR-1175      H3N8马流感病毒荧光RT-PCR检测试剂盒      48                               

QTR-1176      禽流感病毒和新城疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒 48                               

QTR-1177      禽滑液囊支原体抗体诊断试剂盒                                         

QTR-1178      禽滑液囊支原体抗体诊断试剂盒                                         

QTR-1179      鸡新城疫病毒抗体检测试剂盒                                      

QTR-1180      鼠肝炎病毒抗体检测试剂盒                                         

QTR-1181      禽肺病毒（禽气管炎）抗体检测试剂盒                                       【胎盘羊膜细胞】

QTR-1182      羊边界病毒抗体诊断试剂盒                                         

QTR-1183      沙门氏菌共价混合物酶联法抗体诊断试剂盒                                      

QTR-1184      猪伪狂犬病毒gB抗体诊断试剂盒                                       

QTR-1185      猪伪狂犬病毒gE抗体诊断试剂盒（gE抗体）                                   

QTR-1186      口蹄疫病毒抗体诊断试剂盒(3ABC抗体)                                     

QTR-1187      牛布鲁氏杆菌竞争酶联法抗体诊断试剂盒                                         

QTR-1188      牛布鲁氏杆菌间接酶联法抗体诊断试剂盒                                         

QTR-1189      牛副流感3型抗体诊断试剂盒                                      

QTR-1190      牛呼吸道合胞体病毒抗体检测试剂盒                                         

QTR-1191      牛冠状病毒抗体诊断试剂盒                                         

QTR-1192      嗜肺军团菌血清组1检测试剂盒                                         

QTR-1193      嗜肺军团菌血清组2-14检测试剂盒                                     

QTR-1194      军团菌乳胶凝集试剂盒                                         

QTR-1195      嗜肺军团菌主要血清组1检测试剂盒                                         

QTR-1196      炭疽杆菌抗原快速检测试剂盒                                      

QTR-1197      鼠疫菌抗原快速检测试剂                                       【胎盘羊膜细胞】

QTR-1198      土拉热菌抗原快速检测试剂                                         

QTR-1199      类鼻疽菌抗原快速检测试剂                                         

QTR-1200      鼻疽菌抗原快速检测试剂