【卵巢成纤维细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【卵巢成纤维细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【卵巢成纤维细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【卵巢成纤维细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9015186  Tip Guard, M96            CNY                                  

9015094  Vacuum Manifold Top, SBS          CNY                            【卵巢成纤维细胞】   

9015021  Tubing, retractable tubing, DISU, BR8 RD          CNY                                  

1031586  Buffer TCL, 2x (8,5/15),G           CNY                                  

1027986  Buffer MRL (90/125),KG             CNY                                  

62724     EZ1 DSP Virus Kit (48)  CE-IVD Certified Kit for Extraction of DNA ａnd RNA Viruses from Plasma ａnd Serum. To be used in combination with EZ1 DSP Instrument (SAP 9001360) ａnd EZ1 DSP Virus Card (SAP 9017707). Available Input Volumes 100/200/400 µl, selectable elution volumes 60/90/120/150 µl. Processing time for 6 samples 45 Minutes.      CNY                                  

9243521  QIAlink, Maintenance / Support Agreement  Support for QIAlink interface with LIMS system. Includes yearly licensing fees, maintenance cost ａnd software updates. Labor ａnd travel included.   CNY                                  

9014405  Connecting plate, BR3000-RapidPlate          CNY                                  

9014313  BGR Bottle Holder Rotor              CNY                                  

9018152  Cable, eluate drawer, Qsym          CNY                                  

9018151  Eluate drawer, Qsym            CNY                                  

9018141  Heated shaker, Qsym            CNY                                  

9018138  PCB, control, et/hs, Qsym            CNY                                  

9018127  Motor, x, extractor, Qsym            CNY                                  

9018088  Cooling adapter, tubes, 2 ml, Qsym             CNY                                  

9018085  Cooling adapter, MTP, RB, Qsym         CNY                                  

9018081  Software Package QIAplex MDD         CNY                                  

9017853  CD, User Manual QIAcube           CNY                            【卵巢成纤维细胞】   

9017699  EX.UNIT, RCS Incubator Tower (65°)        CNY                                  

9015148  Z-Module 300 µl, BR8 RD            CNY                                  

9015072  EX.UNIT, Syringe Pump Plato 3000 (7135)        CNY                                  

9015064  Shakerplate, autom., BR8 RD              CNY                                  

9019731  Board, A/D, V2, QX             CNY                                  

9001550  Rotor-Gene Q 2plex Platform              CNY                                  

9013723  Motor-X, RCS1            CNY                                  

9013676  Drive Unit MP Holder LH, Shaker BR8000          CNY                                  

9013675  Shakerplate, autom., BR8000        CNY                                  

9013435  Maintenance Kit BR 9600 (B)        CNY                                  

9013427  Maintenance kit, semi annual, BR9600 (A)          CNY                                  

9019655  Quick lock plug, PyroVW            CNY                                  

9019621  Tip ejector holder (incl. magnet), Cx2          CNY                                  

9019605  Pipettor, spring guard ring (black), Cx2              CNY                                  

9019575  Opto switch, X-axis, Cxx             CNY                                  

QC024    包涵体溶解液       50ml                                  

QC025    蛋白复性液    100ml                                

QC026    蛋白标准(5mg/ml BSA) 1ml                              【卵巢成纤维细胞】

QC027    PMSF(100mM)      1ml                             

QC028    5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液  250ml                                

QC029    SDS-PAGE电泳液(10X)      100ml                                

QC030    SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) 2ml                             

QC031    非变性PAGE蛋白上样缓冲液(5X)    2ml                             

QC032    10%过硫酸铵 1.5ml                                 

QC033    30% 丙烯酰胺 (29:1)   100ml                                

QC034    40% 丙烯酰胺 (39:1)   100ml                                

QC035    0.5M DTT      2ml                             

QC036    10% SDS       50ml                                  

QC037    TEMED  5ml                             

QC038    1M Tris-HCl,pH6.8 50ml                                  

QC039    1.5M Tris-HCl,pH8.8     100ml                                

QC040    Western转膜缓冲液 （20x）     100ml                                

QC041    Western一/二抗稀释液 100ml                                

QC042    Western封闭液(BSA型）    100ml                                 【卵巢成纤维细胞】

QC043    Western洗涤液     250ml                                

QC044    Western一抗二抗去除液     250ml                                

QC045    BCIP工作液 50mg/ml  100ul                                 

QC046    NBT工作液 50mg/ml   100ul                                 

QC048    10% Sodium Azide (叠氮钠) 100ml                                

QC049    Protease Inhibitor  A(广谱性)     1ml                             

QC050    Protease Inhibitor  B(适用于细菌)      1ml                             

QC051    Protease Inhibitor  C(适用于哺乳动物)     1ml                             

QC052    Protease Inhibitor  D(适用于真菌)     1ml                             

QC053    Protease Inhibitor  E(适用于哺乳动物)      1ml                             

QC054    Phosphatase Inhibitor M(广谱性)  1ml                             

QC055    胰酶细胞消化液    100ml