【甲状腺滤泡上皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【甲状腺滤泡上皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【甲状腺滤泡上皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【甲状腺滤泡上皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9019715  PyroMark Q24 User Manual         CNY                                  

9019648  Mixer module w. top plate, PyroQ96ID        CNY                                  

9019643  Sensor, solenoid, EZ1xl         CNY                                  

9019589  Cable harness, x axis, C34            CNY                                  

9019587  PCB, mainboard, QGY          CNY                                  

9019582  End cap, Y-arm, Cxx             CNY                                  

9019551  Fuse, 2A        CNY                                  

9019513  Adapter, reagent tub plate, CX1            CNY                                  

9019502  TANK UPPER BUFFER ASSY GS        CNY                                  

218073    miScript SYBR Green PCR Kit (200)           CNY                            【甲状腺滤泡上皮细胞】   

218061    miScript Reverse Transcription Kit (50)              CNY                                  

217504    miRNeasy FFPE Kit (50)              CNY                                  

9019441  Mother board ( micro board V 2.1 )            CNY                                  

204245    QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (1000)       For 1000 x 50 ul reactions:  25 ml QuantiTect SYBR Green RT-PCR Master Mix (providing a final concentration of 2.5 mM MgCl2), 0.5 ml QuantiTect RT Mix, 20 ml RNase-free water   CNY                                  

204156    QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (2000)        CNY                                  

204074    Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit (400)      The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit is dedicated for use with the Rotor-Gene Q cycler, providing ultrafast, highly specific quantification in real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using SYBR Green I.      CNY                                  

9019432  Hose, cooling blower, RG3           CNY                                  

9019423  Belt, toothed, source optics, RG3         CNY                                  

9019394  Gasket, cooling flap, RG3            CNY                                  

9019385  EPROM, IC main board, state F/W, RG3            CNY                                  

9019367  Gasket, lower chamber, RG6        CNY                                  

1027419  Flexitube siRNA 20 nmol W Modification            CNY                                  

1027412  FlexiPlate siRNA - 0.25 nmol        CNY                                  

9019323  Board, main, no microprocessor, RG6         CNY                                  

9234699  Mikrowin              CNY                                  

9020439  Cap - Vacuum bottle, PyroVW             CNY                            【甲状腺滤泡上皮细胞】   

9234458  Coupling, CPC, screw, male         CNY                                  

9233726  Rack for Murex Reagents GE 14/15 (P1/3)         CNY                                  

9019199  Hinge kit - Robot, PyroQ96MD            CNY                                  

1074536  QIAsymphony Circulating NA Kit(48),cus,G              CNY                                  

9019880  Lid with LED, silver, RGQ           CNY                                  

9019839  PyroMark Computer (OPC), PyroQ96         CNY                                  

9019813  Service kit, pipettor 8 ch w/tool, Cx8          CNY                                  

QKG-196              规格：200次                            

QKG-197              规格：1000次                                 

QKG-198       超纯RNA提取试剂盒 Ultrapure RNA Kit (DNase I) 规格：50次                              

QKG-199       病毒RNA提取试剂盒 RNApure Virus Kit  规格：50次                              

QKG-200       miRNA提取试剂盒 miRNA Purification Kit       规格：50次                              

QKG-201       固定组织RNA提取试剂盒 RNApure FFPE Kit 规格：50次                              

QKG-202       血液RNA提取试剂盒 RNApure Blood Kit 规格：50次                              

QKG-203       血液RNA提取试剂盒 RNApure Blood Kit (DNase I)       规格：50次                              

QKG-204       动物组织/细胞RNA提取试剂盒 RNApure Tissue&Cell Kit     规格：50次                              

QKG-205       动物组织/细胞RNA提取试剂盒 RNApure Tissue&Cell Kit (DNase I)    规格：50次                              

QKG-206       细菌RNA提取试剂盒 RNApure Bacteria Kit     规格：50次                               【甲状腺滤泡上皮细胞】

QKG-207       细菌RNA提取试剂盒 RNApure Bacteria Kit (DNase I)    规格：50次                              

QKG-208       植物RNA提取试剂盒 RNApure Plant Kit  规格：50次                              

QKG-209       植物RNA提取试剂盒 RNApure Plant Kit (DNase I) 规格：50次                              

QKG-210       全能型植物RNA提取试剂盒 OminiPlant RNA Kit (DNase I)  规格：50次                              

QKG-211 游离RNA(血清血浆尿液等)提取试剂 RNApure Circulating Reagent      规格：50次                              

QKG-212       酵母RNA提取试剂盒 RNApure Yeast Kit (DNase I) 规格：50次                              

QKG-213       RNA纯化试剂盒 RNA Cleanup Kit     规格：20次                              

QKG-214       DNA/RNA提取试剂盒 AllPure DNA/RNA Kit    规格：50次                              

QKG-215       DNA/RNA/Protein提取试剂盒 AllPure DNA/RNA/Protein Kit  规格：50次                              

QKG-216       磁珠法DNA纯化回收试剂盒 MagBead DNA Purification Kit (for NGS Size Selection) 规格：5ml                                

QKG-217              规格：50ml                               

QKG-218       磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 MagBead Gel Extraction Kit   规格：100次                            

QKG-219              规格：400次                            

QKG-220       磁珠法血液DNA提取试剂盒 MagBead Blood DNA Kit    规格：48次                              

QKG-221              规格：100次                            

QKG-222              规格：400次                             【甲状腺滤泡上皮细胞】

QKG-223       磁珠法血片DNA提取试剂盒 MagBead Blood Spots DNA Kit  规格：100次                                      

QKG-224              规格：400次                            

QKG-225       游离DNA样本保存管 Cell-Free DNA Storage Tube (5 ml)      规格：5支                                

QKG-226              规格：50支