【真皮微血管内皮细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【真皮微血管内皮细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【真皮微血管内皮细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【真皮微血管内皮细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9016732  Security Key, LC Policy Manager, encoded         CNY                                  

9019887  Lid, label BC1, RG3              CNY                                  

9019884  Cover, main, label CoResearch, RG3           CNY                                  

9019883  Optical source ａnd detector assy , RG3              CNY                                  

9019767  Sensor, interlock1, with cable, QX              CNY                                  

9238801  Round Bucket w/ thread, sealable w/ cap     Sigma part no. 13350     CNY                                  

9019725  Rotor-Disc Heat Sealer 230V        CNY                                  

9019663  PyroMark Vac Prep Tool, PyroQ96VW        CNY                            【真皮微血管内皮细胞】   

9019618  Motor, Z-axis, Cx2        CNY                                  

9019615  Pipettor, spring, Cx2             CNY                                  

9019600  O-ring, filter housing seal, 2mm, CX1         CNY                                  

9019572  Pulley, Idler X-axis, Cxx              CNY                                  

9019569  Stop pin, X-axis, Cxx           CNY                                  

9019536  Pipetting Station RD, RCS            CNY                                  

9019534  Home flag, Z-axis, CQx        CNY                                  

9019531  UV light assembly, QIA         CNY                                  

9019396  Motor, stepper, rotor drive, RG3          CNY                                  

9019352  Solenoid, cooling flap, RG6          CNY                                  

9019351  Fan, cooling blower, RG6             CNY                                  

9019334  Kit, Heater FET & drivers, RG6           CNY                                  

9234763  cable, flat band, 1500 mm            CNY                                  

9234433  Boundary, SIS, rigth             CNY                                  

1027286  AllStars Neg. siRNA AF 555 (5 nmol)          CNY                                  

9233457  Flange, pressure sensor         CNY                            【真皮微血管内皮细胞】   

9019231  Motor - X/Y, PyroQ24          CNY                                  

9019224  Pump - Pressure, PyroQ24           CNY                                  

9019219  Gripper arm kit, PyroQ96MD              CNY                                  

9019210  Barcode reader, PyroQ96MD        CNY                                  

9011927  Tip-disposal unit, v1.02         CNY                                  

1066849  PG AIV-H7 RT-PCR Assay (48) LE Z          CNY                                  

1066853  PG AIV-H9 RT-PCR Assay (48) LE Z          CNY                                  

9232908  Card, dispenser unit, BR8000        CNY                                  

1061066  Sample Preparation Reagents, 30ml Z          CNY                                  

QKG-258       NGS Fast DNA Library Prep Set for Illumina      规格：24次                                       

QKG-259              规格：96次                              

QKG-260       二代测序接头引物试剂盒I  规格：24次                                       

QKG-261              规格：96次                              

QKG-262                                                

QKG-263       二代测序接头引物试剂盒II (Illumina)       规格：24次                                       

QKG-264              规格：96次                              

QKG-265       细菌蛋白抽提试剂盒 Bacterial Protein Extraction Kit       规格：25次                              

QKG-266              规格：100次                                  

QKG-267       哺乳动物蛋白抽提试剂盒 Mammalian Protein Extraction Kit   规格：25次                              

QKG-268              规格：100次                                  

QKG-269       酵母蛋白抽提试剂盒 Yeast Protein Extraction Kit     规格：25次                              

QKG-270              规格：100次                                   【真皮微血管内皮细胞】

QKG-271       组织蛋白抽提试剂盒  Tissue Protein Extraction Kit                                   

QKG-272       组织蛋白抽提试剂盒 Tissue Protein Extraction Kit   规格：25次                              

QKG-273              规格：100次                                  

QKG-274       Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒 Nuclear ａnd Cytoplasmic Extraction Kit  规格：50次                                  

QKG-275       植物蛋白提取试剂盒 Plant Protein Extraction Kit     规格：25次                              

QKG-276       RIPA Lysis Buffer (Strong)    规格：100ml                                  

QKG-277       RIPA Lysis Buffer (Medium)  规格：100ml                                  

QKG-278       RIPA Lysis Buffer (Mild)       规格：100ml                                  

QKG-279       SDS Lysis Buffer   规格：100ml                                  

QKG-280       包涵体蛋白溶解液 Inclusion Body Denature Reagent       规格：100ml                                  

QKG-281       蛋白酶抑制剂混合物 Protease Inhibitor Cocktail (100×) 规格：1ml                                   

QKG-282       蛋白磷酸酶抑制剂混合物 Phosphatase Inhibitor Cocktail (100×)   规格：1ml                                   

QKG-283       Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)   规格：5ml                                    

QKG-284       Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)   规格：5ml                                    

QKG-285       Ni-Agarose Resin   规格：10ml                               

QKG-286       GST琼脂糖凝胶 Glutathione-Sepharose Resin   规格：10ml                                    【真皮微血管内皮细胞】

QKG-287       Protein A Agarose   规格：5ml                                   

QKG-288       Protein G Sepharose      规格：5ml