【成人真皮成纤维细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【成人真皮成纤维细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【成人真皮成纤维细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【成人真皮成纤维细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9014642  System Reagent Troughs (Qty 10)              CNY                            【成人真皮成纤维细胞】   

9019188  Mirror, PyroQ96           CNY                                  

1064181  EGFR RGQ PCR Kit (24) IUO             CNY                                  

1017647  Carrier RNA(poly A) 12x1350µg-15-25°C,KG            CNY                                  

1059454  ResPlex II Plus Panel (25) PRE            CNY                                  

1055628  TopElute Fluid (60/60),KG           CNY                                  

1061068  Sample Preparation Reagents, 30ml             CNY                                  

1061104  UU PCR REAGENT I           CNY                                  

9016583  ZLV Pipetting Posit., RCS1           CNY                                  

9016561  BR MDx DSP Serv.pro Plasticware Kit, V1         CNY                                  

9016505  Rect. Bucket Set (4)             CNY                                  

9016486  Cable Dilutor bus, RS485, Kloehn        CNY                                  

9016288  Cable, RS232, EZ1a              CNY                                  

9019181  PCB 7 - Connection, PyroQ96MD        CNY                                  

9019115  Fan - IPC, PyroQ96ID          CNY                                  

9019101  Rotor-Gene Q Software        CNY                                  

9019079  PyroMark Assay Design SW 2.0 (5)     "All-in-one software for design of both PCR ａnd sequencing primers

Five additional software licenses for PyroMark AssayDesign SW 1.0"       CNY                            【成人真皮成纤维细胞】   

9019071  PyroMark Thermoplate, PyroQ96MD   Holder for placement of PyroMark Q96 Plate on heat block during annealing step prior to PyroMark Q96 MD analysis.    CNY                                  

9019017  Tray, EZ1xl           CNY                                  

9019008  Reflector, UV lamp, EZ1xl            CNY                                  

9018934  Adapter, 24x5ml flat base Tubes          CNY                                  

9016014  X-Motor DC, Gear, 20V        CNY                                  

9016003  BioSprint 15 tube tray    "he 5-tube strips sit on this tray during the run.

see page 33 of the user manual for visuals"  CNY                                  

9015972  Tube Holder, STS MDx, 15 mm (12)          CNY                                  

9015910  Luminex Maintenance Kit             CNY                                  

9015862  EZ1 DNA PRFN Card    Pre-programmed card for BioRobot EZ1 paraffin section protocols    CNY                                  

9015687  Rings (10), pinching, 4.5/2.7 mm         CNY                                  

9015613  Cable, Interface, 3000 mm, PC to X-main           CNY                                  

9015606  Upgrade, LiquiChip IS 2.x            CNY                                  

9015536  Door, complete             CNY                                  

9019165  Lead screw - Y, PyroQ96MD        CNY                                  

9019163  Reagent chamber lid, PyroQ96MD              CNY                                  

9013928  Channeling Adapter BR8000          CNY                            【成人真皮成纤维细胞】   

QR20-60 DL2000   100次                                

QR20-61 DL5000   50次                                 

QR20-62 DL5000   100次                                

QR20-63 100bp Ladder  50次                                  【成人真皮成纤维细胞】

QR20-64 100bp Ladder  100次                                

QR20-65 200bp Ladder  50次                                 

QR20-66 200bp Ladder  100次                                

QR20-67 1kbp Ladder   10次                                 

QR20-68 1kbp Ladder   50次                                 

QR20-69 DM15000       50次                                 

QR20-70 DM15000       100次                                

QR20-72 超纯水    10次                                 

QR20-73 Taq DNA Polymerase     500U                                  

QR20-74 Taq DNA Polymerase     1000U                                

QR20-75 2 x Taq MasterMix 1ml                             

QR20-76 2 x Taq MasterMix 3ml                             

QR20-77 Pfu DNA Polymerase     250U                                  

QR20-78 Pfu DNA Polymerase     500U                                  

QR20-79 2 x Pfu MasterMix 1ml                             

QR20-80 2 x Pfu MasterMix 3ml                              【成人真皮成纤维细胞】

QR20-81 HotStar Taq DNA Polymerase       125U                                  

QR20-82 HotStar Taq DNA Polymerase       500U                                  

QR20-83 2 x HotStar Taq MasterMix   1ml                             

QR20-84 2 x HotStar Taq MasterMix   3ml                             

QR20-85 Oligo(dT)15    500μl(10μM)                             

QR20-86 M-MLV反转录酶  10000U                              

QR20-87 M-MLV反转录酶  50000U                              

QR20-88 M-MLV cDNA链合成试剂盒      20次                                 

QR20-89 M-MLV cDNA链合成试剂盒      50次                                 

QR20-90 Thermo M-MLV Reverse Transcriptase       10000U                              

QR20-91 Thermo M-MLV Reverse Transcriptase       50000U