【内脏脂肪细胞】下面是细胞株培养的具体无菌技术要点：

1. 实验开始前，无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌，用70%ethanol擦拭无菌操作台面，并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后，才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株，即使培养基完全相同也不可共用培养基，以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后，请将实验物品拿出工作台，用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后，才能进行下一个细胞株的操作。

2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞，必要物品（试管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暂时放置，其它实验用品使用完毕后应移出，有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成，请勿在边缘非无菌区域进行操作。

3. 小心取用无菌实验物品，避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处，也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后，请用手夹住瓶盖并轻握瓶身，倾斜大约45°角取用，尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。

4. 工作人员应当首先注意自身安全，必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作，并选择适当等级的无菌操作台进行（至少是Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol的产生，小心有毒性药品，例如DMSO和TPA等，并避免针头的伤害等等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶的CO2压力

5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染（水盘的水需用无菌水，每周定时更换）。

5.3. 无菌操作台内的airflow压力，定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。

6. 水槽内可添加消毒剂（Zephrin 1:750），需定期更换水槽中的水。

【内脏脂肪细胞】齐一生物友情提醒，本产品仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一细胞说明，具体详细请见细胞附带说明书

 二、客户自备试剂

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、细胞背景

1、生长方式：贴壁

2、种属：Homo sapiens  人

四、培养条件

1、培养基：RPMI-1640 培养基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗

2、温度：37.0°C

3、气体:空气  95%，CO2 5%

【内脏脂肪细胞】五、培养方法

 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：

 如果细胞未长满，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml 培养液继续培养。如果细胞已长满（达 80-90%）。即可进行传代，具六、体步骤如下：

1，弃去培养液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶内加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。

3，加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养

4，传代比例：1:2-1:3  

七、常见问题及解决方案

1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。

2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留 10ml 培养液培养观察，细胞生长至汇合度 80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。

细胞培养代理品牌

细胞培养代理品牌

【内脏脂肪细胞】齐一生物科技（上海）有限公司是一家专业生产和销售各种生化试剂,细胞株、原代细胞、菌种、医药中间体,标准品和对照品的大型化学科技公司. 齐一生物销售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9020316  PM kit, C12 & QIAgility, CG1             CNY                                  

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9236486  #Agreement, Plato 3, PM, 1 yr      An agreement for preventive maintenance provides coverage for travel, labor, ａnd parts, plus the cost of consumables required for the maintenance visit. Work carried out during the preventive maintenance visit is fully documented in accordance with GMP/GLP directives. CNY                                  

9236446  Travel Charge, zone A           CNY                                  

9236439  1.0 hr             CNY                                  

9011884  Holder, tip rack 2           CNY                                  

9236982  Power Supply, 400W, BR8, RD v1.0           CNY                                  

9019142  X/Y table, PyroQ96ID           CNY                            【内脏脂肪细胞】      

9019128  Camera MX5, PyroQ96ID            CNY                                  

9019127  Heating block, PyroQ96ID           CNY                                  

9019027  Pin, piercing, EZ1          CNY                                  

9019026  Worktable, side wall, right, EZ1xl         CNY                                  

9018959  Master Mix Block, 5x5ml Tubes          CNY                                  

9018952  Reagent Block, 16x0.2ml/1.5ml PCR/FlatBa        CNY                                  

9018941  Adapter, COBAS TaqMan 48 Plates             CNY                                  

9015617  Precision Pipetting Calibration Kit  "The 9015617 Kit comprised

- 9236744 96-Well Microplate FB (24)

- 9238096 Tartazine Powder (25 g)

- 9238264 Handbook"    CNY                                  

9015590  EZ1 RNA Card       Pre-programmed card for EZ1 RNA purification protocols  CNY                                  

9015533  Cover, back ,type C              CNY                                  

9015520  Door Lock Upgrade Kit, BR EZ1          CNY                                  

9014187  Tube Holder, STS, 5ml, 16 pos (6)              CNY                                  

9014154  RoboVac, Base, BR8 RD, v4.2      This is the new version containing the locking mechanism see ISI note 51b-Jenith       CNY                                  

9013993  Belt, Y-drive, Mounting Tool, BR8000          CNY                                  

9021177  Controller, Z Axis, VRA, DCU              CNY                                  

9021162  Output Rack, 96 pos, DCU           CNY                            【内脏脂肪细胞】      

9021058  Door Assy, Upper Left, DCU        CNY                                  

9021013  Controller, Theta Rotary, DCU             CNY                                  

QR20-123      10%SDS溶液       100ml                                

QR20-124      PBS 500ml                                

QR20-125      PBST      500ml                                

QR20-126      TBS 500ml                                

QR20-127      TBST      500ml                                

QR20-128      Tris-Glycine   500ml                                 【内脏脂肪细胞】

QR20-129      Tris-Glycine SDS   500ml                                

QR20-130      1.5M Tris-Cl(pH8.8)      500ml                                

QR20-131      0.5M Tris-Cl(pH6.8)      500ml                                

QR20-132      超纯dNTP(2.5mM each)      0.5ml                                 

QR20-133      超纯dNTP(2.5mM each)      1ml                             

QR20-134      超纯dNTP(10mM each）    250μl                                

QR20-135      超纯dNTP(10mM each）    500μl                                

QR20-136      超纯dATP(100mM)      0.5ml                                 

QR20-137      超纯dGTP(100mM)     0.5ml                                 

QR20-138      超纯dCTP(100mM)      0.5ml                                 

QR20-139      超纯dTTP(100mM)      0.5ml                                 

QR20-140      RNase A 溶液（10mg／ml）      50μl                                 

QR20-141      Proteinase K（20mg／ml）  1ml                             

QR20-142      6 x Loading Buffer 5ml                             

QR20-143      RNase-Free Water  10ml                                  

QR20-144      红细胞裂解液       100ml                                 【内脏脂肪细胞】

QR20-145      水饱和酚       250ml                                

QR20-146      Tris饱和酚    250ml                                

QR20-147      5 x TBE  500ml                                

QR20-148      50 x TAE 50ml                                  

QR20-149      Lyticase   150mg                               

QY-L0001       阿魏酸1135-24-6  Ferulic acid     1135-24-6       20mg                   

QY-L0002       阿魏酸乙酯4046-02-0  Ethyl 4＇-hydroxy-3＇-methoxycinnamate 4046-02-0      20mg                   

QY-L0003       阿魏酸松柏酯63644-62-2    Coniferyl ferulate    63644-62-2     20mg                   

QY-L0004       异阿魏酸537-73-5       3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid     537-73-5 20mg