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齐一生物科技(上海)有限公司

产品介绍

甲睾酮检测试剂盒

价 格:¥电议

型 号:

产品完善度:

生产地:其他访问量:25次

发布日期:2016/8/21 11:35:12

更新日期:2016/8/21 11:35:12

详细内容

 齐一生物销售:0216034 8496181214 53965173021 04490

 

高回收率(75%-105%),多种样品的低成本提取方法;高重复性;检测过程只需要不到1.5小时;五合一处理方法更省时、经济、环保。

 

产品概述

甲睾酮检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理,含有甲睾酮检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时,样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM,会竞争SEM抗体,抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后,产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板(可拆式)                                            12×8

标准液(00.0250.10.41.66.4ppb                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存,有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒,

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

 

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50100mL1mL各一支)

7)      多道移液器(50-300mL

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K2HPO4

10) 正己烷

 

注意事项

实验前请阅读以下文字,以保证获得佳实验效果。

1)      标准品中含有甲睾酮检测试剂盒,请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用,抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃,避免在通风口操作防止温度过低,过热和/或者蒸发。同样的,不要在阳光直射下实验,防止过热及蒸发。在孵育期间,如果工作台温度过低,应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要,确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时,吸嘴靠于微孔接近底部,并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好,保持添加标准品的一致性,先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品,降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中,冷藏保存。

样品的准备甲睾酮检测试剂盒

确保样品的正确保存,一般来说,样品在2-4只能保存1-2天,如果要保存更长时间,就要保存在-20冷冻保存,在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

 

1×样品提取液

19的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1)饲料(用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM

(1)    0.5g匀质样品,加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL蒸馏水,0.5mL 1M HCl20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛,涡旋振荡1min

(2)    50°C恒温培养3小时,在培养期间,每1h振荡5秒;

(3)    加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH6 mL 乙酸乙酯,转速涡旋震荡1min

(4)    室温下4000g离心10分钟;

(5)    3mL乙酸乙酯上清液(含0.25g初始样品)到另一试管(避免触及下层水相!如果

移取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干;

(6)    1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;

(7)    加入1mL1×样品提取液,转速涡旋振荡2分钟;

(8)    室温下4000g离心10分钟;

(9)    每孔取100 µL下清液,进行样品测试。

稀释倍数:4.0

2)鱼//肉(牛肉/鸡肉/猪肉):可用于五合一前处理方法

(1)    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL蒸馏水,0.5mL 1M HCl20µL50 mM 2-硝基苯甲醛,涡旋震荡30

(2)    50°C恒温培养3h,培养期间,每1h振荡5秒;(说明书后的**标记方法可供选择)

(3)    加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH 6 mL 乙酸乙酯,涡旋震荡振荡30s

(4)    室温下(20-25℃)4000g离心10分钟;

(5)    3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管(避免触及下层水相!如果移取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),如果出现乳化现象,上清液不足3mL,请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干;

(6)    1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;(注:肝脏组织富含脂肪、色素等,为防止乳化现象,建议选用4mL正己烷溶解,涡旋震荡30秒后,再进行下一步操作)

(7)    加入1mL1×样品提取液,剧烈振荡1分钟;

(8)    室温下4000g离心10分钟;

(9)    每孔取100 µL下清液,进行样品测试。

注意:为了避免过高的背景值,建议用空白样品做平行,从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数:2.0

 

3)鸡蛋甲睾酮检测试剂盒

(1)    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL蒸馏水,0.5mL 1M HCL20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛,剧烈振荡30秒;

(2)    50°C恒温培养3小时,在培养期间,每1h振荡5秒;(说明书后的**标记方法可供选择)

(3)    加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH 6 mL 乙酸乙酯,涡旋震荡振荡30s

(4)    室温下4000g离心10分钟;

(5)    3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管(避免触及下层水相!如果移取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干;

(6)    1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;

(7)    加入1mL1×样品抽提工作液体,剧烈振荡2分钟;

(8)    室温下4000g离心10分钟;

(9)    每孔取100µL下清液,进行样品测试。

稀释倍数:2.0

注意:为了避免过高的背景值,建议用空白样品做平行,从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4)蜂蜜

(1)    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL双蒸水,0.5mL 1M HCL20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛,剧烈振荡1分钟;

(2)    50°C恒温培养3小时;(说明书后的**标记方法可供选择)

(3)    加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH 6 mL 乙酸乙酯,转速振荡1min

(4)    室温下4000g离心10分钟;

(5)    3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管(避免触及下层水相!如果移取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干;

(6)    1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;

(7)    加入1mL1×样品提取液,剧烈振荡2分钟;

(8)    室温下4000g离心10分钟;

(9)    每孔取100 µL下清液,进行样品测试。

稀释倍数:2.0

 

5)牛奶

(1)    对于含脂牛奶,取待测牛奶样品3ml室温4000g5min。除去上层脂肪层。(对于脱脂奶粉,次步略)

(2)    1ml样品,加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL双蒸水,0.5mL 1M HCL40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛,剧烈振荡1分钟

(3)    50°C恒温培养3小时;(说明书后的**标记方法可供选择)

(4)    加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH6 mL 乙酸乙酯,转速振荡1min室温下4000g离心10分钟;

(5)    3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管(避免触及下层水相!如果移取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干;

(6)    1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;

(7)    加入1mL1×样品提取液,剧烈振荡2分钟;

(8)    室温下4000g离心10分钟;

(9)    每孔取100 µL下清液,进行样品测试。

     稀释倍数:2.0

6)血清甲睾酮检测试剂盒

(1)        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL双蒸水,0.5mL 1M HCL20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛,剧烈振荡1分钟;

(2)        50°C恒温培养3小时;(说明书后的**标记方法可供选择)

(3)        加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH 6 mL 乙酸乙酯,转速振荡1min

(4)        室温下4000g离心10分钟;

(5)        3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管(避免触及下层水相!如果移

取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干;

(6)        1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;

(7)        加入1mL1×样品提取液,剧烈

(8)        振荡2分钟;

(9)        室温下4000g离心10分钟;

 

(10)    每孔取100 µL下清液,进行样品测试。

     稀释倍数:2.0

7)尿样

(1)    3ml尿样,4000g离心5min

(2)    离心后称取1ml,加入0.5mL1×样品提取液,3.5mL双蒸水,0.5mL 1M HCL40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛,剧烈振荡1分钟

(3)    50°C恒温培养3小时;(说明书后的**标记方法可供选择)

(4)    加入5mL 0.1 M K2HPO40.4 mL 1 M NaOH 6 mL 乙酸乙酯,转速振荡1min

(5)    室温下4000g离心10分钟;

(6)    3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管(避免触及下层水相!如果移取液中含有水相,再次4000g离心5分钟,取上层有机相),在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干;

(7)    1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品;

(8)    加入1mL1×样品提取液,剧烈振荡2分钟;

(9)    室温下4000g离心10分钟;

(10)    每孔取100 µL下清液,进行样品测试。

稀释倍数:2.0

检测步骤

试剂的准备

注意:试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时,确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂,所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量,不能将试剂倒回原来的瓶子中,处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

 

\以下为计算份量的表格,用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

 

试剂

每个反应需要的体积

24次反应的体积

SEM-HRP

50 mL

1.2mL

1×洗液

1mL

24 mL

终止液

100 mL

2.4 mL

底物

100 mL

2.4 mL

底物

100 mL

2.4 mL

(1)    加入100mL的标准品于所设定的孔中;

(2)    加入100mL的样品于所设定的孔中

(3)    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP,轻敲微孔板边缘混匀1分钟;

(4)    室温(22.5±2.5)°C避光孵育30分钟;

(5)    洗板3次,每次应该加入250mL 1×洗液,后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干;

(6)    每孔加入100mLTMB底物;

(7)    在室温22.5±2.5)°C避光孵育20分钟后,每孔加入100mL的终止液终止反应;

(8)    450nm450/650nm下读OD (读数前,用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去,避免影响读数)

 

10.结果计算甲睾酮检测试剂盒

(1)    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

(2)    以相对吸光度值为纵坐标,标准浓度为横坐标建立标准曲线。

(3)    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

(4)    样品检测下限计算方法如下:

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如,肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb

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74524       RNeasy Protect Bacteria Mini Kit (50)     RNeasy Mini Kit (50) and RNAprotect Bacteria Reagent (2 x 100 ml)     CNY                              【甲睾酮检测试剂盒】

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19055       Buffer QC 1000 ml Wash Buffer        CNY                             

13362       Blood & Cell Culture DNA Maxi Kit  10 QIAGEN Genomic-tip 500/G, QIAGEN Protease, Buffers   CNY                             

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CompactPrep Plasmid Kits enable fast, large-scale plasmid purification in a miniprep format. The use of a vacuum manifold allows 24 samples to be purified in parallel on a single workbench"       CNY                             

NG0122   尿糖试剂         100毫升 班氏法                                 【甲睾酮检测试剂盒】

NG0123   尿粪隐血测试盒     100T         联苯胺法                                    

NG0124   碱性磷酸酶染液/cAKPstain   1 可染20-30                            

NG0125   酸性磷酸酶染液/cACPstain   1 可染20-30                            

NG0126   酸性酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0127   中性酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0128   碱性酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0129   双重酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0131   糖元染液/糖原染液/PASStain         10毫升    染色                                    

NG0134   H-E染液/苏木素-伊红染液/Hematoxylin-Eosinstain     25毫升×5      BR                               

NG0135   瑞氏姬姆萨复合染液/瑞氏吉姆萨复合染液/Wright-Giemsastain      90毫升    BR                               

NG0136   快速改良巴氏染液/Fastmodifiedpapanicolaoustain      50毫升×2100毫升×1     BR                               

NG0137   改良巴氏染液/Modifiedpapanicolaoustain    50毫升×5100毫升×1     BR                               

NG0138   植物样本提取液     100毫升 BR                               

NG0139   抗酸染液/Acid-faststain 50毫升×3      BR                               

NG0140   果糖测试盒     50/48      比色法                                

NG0141   微量丙二醛测试盒/MDA测试盒  50/24      比色法                                 【甲睾酮检测试剂盒】

NG0142   细胞活性鉴别染液/Cellviabilitydetectedstain       20毫升    BR                               

NG0143   血管通透性测试染液/Vasopermeabilitystain        20毫升    BR                               

NG0144   过氧化物酶染液/Peroxidasestain  5毫升×32毫升×1   BR                               

NG0145   血清高密度脂蛋白胆固醇测试盒/HDL-C测试盒         80毫升    沉淀分离法手工                                

NG0146   血清低密度脂蛋白测试盒/LDL测试盒         80毫升    手工/半自动                              

NG0147   蔗糖测试盒     50/48      比色法                                

NG0148   蔗糖磷酸合成酶测试盒/SPS测试盒     50/24      比色法                                

NG0149   蔗糖合成酶测试盒/SS测试盒       50/24      比色法                                

NG0150   硝酸还原酶测试盒/NR测试盒      50/24      比色法                                

NG0151   ATP含量测试盒      100/48    比色法                                

NG0152   γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶测试盒/γ-GCS测试盒 100/48    微量定磷法                                

NG0153   F0F1-ATP/ATP合成酶测试盒     20/10      生化法                                

NG0154   二胺氧化酶测试盒/DAO测试盒   25毫升/40T     手工比色法                                

NG0155   质粒提取试剂盒     100T/   BR                               

NG0156   红细胞裂解液         100毫升 BR                               

NG0157   RIPA组织细胞快速裂解液    20毫升    BR                                【甲睾酮检测试剂盒】

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