高回收率(75%-105%)，多种样品的低成本提取方法；高重复性；检测过程只需要不到1.5小时；五合一处理方法更省时、经济、环保。

产品概述

柱孢藻毒素检测试剂盒酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有柱孢藻毒素检测试剂盒(SEM)的抗体已经包被于微孔板上。药物分析时，样品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果样品中含有SEM，会竞争SEM抗体，抑制SEM-HRP与板上包被的抗体结合。加入底物后，产物的颜色强弱与样品中SEM的浓度成反比。

 试剂盒组成

已包被的酶标板（可拆式）                                            12×8 孔

标准液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可选                                        1×0.8ml

HRP酶标抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×样品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×浓缩洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

终止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过3个月不使用试剂盒，

请将SEM-HRP酶标抗原放置-20℃或者冰冻保存。

检测试剂盒以外需要提供的设备或材料

1)      酶标仪(450 nm)

2)      恒温培养箱

3)      匀浆器

4)      蒸干器

5)      漩涡振荡器

6)      移液枪(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事项

实验前请阅读以下文字，以保证获得佳实验效果。

1)      标准品中含有柱孢藻毒素检测试剂盒，请小心使用。

2)      不要使用过期的试剂盒。

3)      不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。

4)      尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5)      水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。

6)      加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7)      孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8)      从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。

9)      将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

样品的准备【柱孢藻毒素检测试剂盒】

确保样品的正确保存，一般来说，样品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更长时间，就要保存在-20冷冻保存，在用之前需要将冷冻的样品在室温下或冰箱内解冻。

1×样品提取液

按1：9的比例配制样品提取浓缩液和双蒸馏水。

1）饲料（用于检测添加到饲料中的鱼粉、虾粉或动物组织的SEM）

（1）    取0.5g匀质样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋振荡1min；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速涡旋震荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始样品）到另一试管（避免触及下层水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70 °C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，转速涡旋振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：4.0

2）鱼/虾/肉（牛肉/鸡肉/猪肉）：可用于五合一前处理方法

（1）    称取1g匀浆样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，涡旋震荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3h，培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下（20-25℃）4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品)到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），如果出现乳化现象，上清液不足3mL，请85℃水浴3分钟。在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；（注：肝脏组织富含脂肪、色素等，为防止乳化现象，建议选用4mL正己烷溶解，涡旋震荡30秒后，再进行下一步操作）

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡1分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

稀释倍数：2.0

3）鸡蛋【柱孢藻毒素检测试剂盒】

（1）    称取1g鸡蛋样品加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL蒸馏水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡30秒；

（2）    50°C恒温培养3小时，在培养期间，每1h振荡5秒；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，涡旋震荡振荡30s；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60-70℃减压蒸馏或60-70℃氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品抽提工作液体，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

注意：为了避免过高的背景值，建议用空白样品做平行，从取3ml乙酸乙酯上清旋转蒸发开始。

4）蜂蜜

（1）    称取1g蜂蜜加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）    室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

5）牛奶

（1）    对于含脂牛奶，取待测牛奶样品3ml室温4000g，5min。除去上层脂肪层。（对于脱脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml样品，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；室温下4000g离心10分钟；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（8）    室温下4000g离心10分钟；

（9）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

6）血清【柱孢藻毒素检测试剂盒】

（1）        称取1g血清加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（2）        50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（4）        室温下4000g离心10分钟；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（7）        加入1mL1×样品提取液，剧烈

（8）        振荡2分钟；

（9）        室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

     稀释倍数：2.0

7）尿样

（1）    取3ml尿样，4000g离心5min。

（2）    离心后称取1ml，加入0.5mL1×样品提取液，3.5mL双蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，剧烈振荡1分钟；

（3）    50°C恒温培养3小时；（说明书后的**标记方法可供选择）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，转速振荡1min；

（5）    室温下4000g离心10分钟；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始样品) 到另一试管（避免触及下层水相！如果移取液中含有水相，再次4000g离心5分钟，取上层有机相），在60 -70°C减压蒸馏或60-70°C氮气吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的样品；

（8）    加入1mL1×样品提取液，剧烈振荡2分钟；

（9）    室温下4000g离心10分钟；

（10）    每孔取100 µL下清液，进行样品测试。

稀释倍数：2.0

检测步骤

试剂的准备

注意：试剂在使用之前要在室温下解冻1-2小时，确定在使用前阅读过注意事项。准备适量的检测用试剂，所有的试剂摇匀后使用。准备足够所有小管所需的用量，不能将试剂倒回原来的瓶子中，处理试剂时建议用废弃的瓶子以降低污染的风险。

1x洗液的制备

1体积的20x洗液同19体积的蒸馏水混合

检测

\以下为计算份量的表格，用户可根据自己的需要来确定需要配置多少试剂。

（1）    加入100mL的标准品于所设定的孔中；

（2）    加入100mL的样品于所设定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

（4）    室温（22.5±2.5）°C避光孵育30分钟；

（5）    洗板3次，每次应该加入250mL 1×洗液，后一次使板尽量甩干并在吸水纸上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室温（22.5±2.5）°C避光孵育20分钟后，每孔加入100mL的终止液终止反应;

（8）    在450nm或450/650nm下读OD值 (读数前，用吸水纸将板底部的指痕和水分擦去，避免影响读数)。

10．结果计算【柱孢藻毒素检测试剂盒】

（1）    分别计算标准、质控和样品的平均吸光度值和相对吸光度值。

相对吸光度值 (%) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值) ´ 100

（2）    以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线。

（3）    从标准曲线上读取质控和样品的浓度值。

（4）    样品检测下限计算方法如下：

样品检测下限 = (0.025ng/g) ´ (稀释倍数)

样品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀释倍数)

例如，肉类样品的稀释倍数是2.0,那么肉类样品的检测下限是0.05ppb,定量检测下限是0.2ppb。

800372     Shipping, Postage, Packaging (express)            CNY                             

800373     Data Carrier              CNY                              【柱孢藻毒素检测试剂盒】

9019521  ZLV ADAPTER KIT M&N 8 STRIP                CNY                             

9019595  ZLV Bush, tip stripper, Cx8                 CNY                             

9019935  Cable harness, X-axis 8 core, CQX              CNY                             

9020596  Tape Foam,045X750 Double Stick,DML 3000           CNY                             

9017843  Tool, cable, communication, RS232, QIAC                CNY                             

9013401  Cable set, cooling system, 90/120             CNY                             

9234873  ZLVPipetting Station for 2 microtit.                   CNY                             

9013395  Tip disposal bags               CNY                             

9013391  Tubing set, PVC, BR9604          CNY                             

9013268  Cable, card-X to solenoid valve, 24V                  CNY                             

9013222  Holder, tube, STS, single, 11 ml (30), 0             CNY                             

9013204  Transportation kit, BR8000               CNY                             

9011759  Reagent holder, 4-tube 13ml  Holder for accommodating 4 microcentrifuge tubes (13 ml) on the worktable; must be used with the reagent holder tray   CNY                             

9011672  Reader Abdeckung spez. GSG (9194)                CNY                             

132605     NeXtal Stock Sodium ac. H2O (50)   1.6M Sodium acetate trihydrate - 50mL (4 x 12,5 ml tube)    CNY                             

800141     Investigation grade sequencing, w/ prep         "Single-stranded sequencing of an unknown sequence

QIAGEN DNA template preparation

Design ａnd synthesis of walking primers

Data assembly ａnd sequence alignment

Accuracy >99%"       CNY                              【柱孢藻毒素检测试剂盒】

767134     PAXgene Tissue DNA Kit (50)            CNY                             

929605     QX Mineral Oil (50 ml)               CNY                             

330513     RT² SYBR Green Fluor qPCR Mastermix (24)             CNY                             

330502     RT² SYBR Green qPCR Mastermix (12)              CNY                             

330401     RT² First Strand Kit (12)            CNY                             

9010813  BGR Stirrer PK80               CNY                             

69506       DNeasy Blood & Tissue Kit (250)     250 DNeasy Spin Columns, QIAGEN Proteinase K, Buffers, Collection Tubes (2 ml)         CNY                             

63204       DyeEx 2.0 Spin Kit (50)     50 DyeEx Spin Columns, Collection Tubes (2 ml)       CNY                             

211392     Internal Control DNA (High conc.)            CNY                             

9012755  Set, Tubing, Washer, P3            CNY                             

9010126  Washer boat             CNY                             

979015     MOTT 16S Primer 1 for Sequencing                   CNY                             

979010     PyroMark Vacuum Prep Filter Probe (100)      Re-usable filter probes for PyroMark Vacuum Workstation Q96 ａnd Q24.         CNY                             

59720       EpiTect Fast 96 DNA Bisulfite Kit               CNY                             

9002245  QIAcube(220-240v) Promo, PrioPLUS      QIAcube (220-240V) Promo Priority includes the QIAcube instrument +promo iPad, installation ａnd extended warranty. Installation covers hardware ａnd software installation of system ａnd provides user with introductory training. Priority package extends warranty period of the system to 3 years. One preventive maintenance visit is included for each year of the warranty; 3 preventive maintenance visits in total. Service package includes all parts, labor ａnd travel costs with a service response time of 48 hours (2 working days). Performance of the installation ａnd service visits are documented on a GMP/GLP-compliant Field Service documents.        CNY                             

QYC405    犬支原体抗体金标检测卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC406    犬冠状病毒检测试纸卡         20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC407    犬腺病毒II 型检测试纸卡   20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC408    犬副流感病毒检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC409    犬心丝虫抗原检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC410    犬狂犬病毒抗原检测试纸卡         20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC411    犬腺病毒1型检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC412    犬流感检测试纸卡         20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC413    猫瘟病毒检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                 【柱孢藻毒素检测试剂盒】

QYC414    猫传染性腹膜炎病毒检测试纸卡         20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC415    猫白血病病毒检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC416    猫免疫缺陷病毒检测试纸卡         20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC417    利什曼虫检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC418    鹦鹉热衣原体检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC419    布氏杆菌抗体检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC420    布氏杆菌抗原检测试纸卡     20T/盒      抗血清检测诊断                                

QYC501    蔬菜农药速测卡     20T/盒      蔬菜农药残留检测                                    

QYC502    茶叶农药速测卡     20T/盒      茶叶农药残留检测                                    

QYC503    "粮食农药速测卡

"       20T/盒      粮食农药残留检测                                    

QYC504    蔬菜农药检测卡     20T/盒      蔬菜农药残留检测                                    

QYC505    高灵敏度农药速测卡     20T/盒      蔬菜农药残留检测                                    

QY101      盐酸克伦特罗检测试剂盒     96孔/盒 各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                                

QY102      莱克多巴胺检测试剂盒         96孔/盒 各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                                

QY103      沙丁胺醇检测试剂盒     96孔/盒 各种动物肌肉组织、肝脏、尿液、血清、饲料等                                

QY104      β-兴奋剂检测试剂盒   96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜                                  【柱孢藻毒素检测试剂盒】

QY105      呋喃唑酮代谢物检测试剂盒         96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜                                 

QY106      呋喃它酮代谢物检测试剂盒         96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜                                 

QY107      呋喃妥因代谢物检测试剂盒         96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜                                 

QY108      呋喃西林代谢物检测试剂盒         96孔/盒 各种动物组织/水产/蜂蜜                                 

QY109      孔雀石绿检测试剂盒     96孔/盒 动物组织/水产/饲料                                 

QY110      氯霉素检测试剂盒         96孔/盒 动物组织/水产/蜂蜜                                 

QY111      氟苯尼考检测试剂盒     96孔/盒 动物组织/水产/蜂蜜                                 

QY112      氟苯尼考胺检测试剂盒         96孔/盒 动物组织/水产/蜂蜜