采用高效液相色谱（HPLC）法测定该制剂中绿原酸的含量,方法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。
　　
　　热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,具有清热解毒之功效,用于治疗流感、上呼吸道感染及各种发热等症[1]。绿原酸为该制剂主药金银花的主要有效成分,具有明显的抗炎、杀菌、抗病毒的作用。
　　
　　1仪器与试药
　　
　　SP8800高效液相色谱仪（美国光谱物理公司）；分析之星色谱工作站；紫外FOCUS检测器。绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所,批号110753-200413）；热毒平颗粒（天津中新药业隆顺榕制药厂,批号0602001、0602002、0602003）。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯净水。
　　
　　2方法与结果
　　
　　2.1色谱条件及系统适应性试验
　　
　　色谱柱：YMC公司ODS-A柱（150mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液（10∶90）；流速：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：327nm；进样量：10μL。理论板数按绿原酸峰计应不低于3000,分离度＞1.5。色谱图见图1。
　　
　　2.2溶液的制备
　　
　　2.2.1对照品溶液的制备
　　
　　精密称取绿原酸对照品4.24mg,置于50mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.0848mg/mL的对照品储备溶液,10℃以下保存。再精密量取4mL置10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,制成含绿原酸0.0339mg/mL的对照品溶液。
　　
　　2.2.2供试品溶液的制备
　　
　　取本品7g,精密称定,研细,混匀,取约0.5g,精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,称定重量,密塞,超声处理（功率250W,频率33kHz）30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
　　
　　2.2.3阴性对照溶液的制备
　　
　　按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按“2.2.2”项下方法,制得阴性对照溶液。
　　
　　2.3标准曲线的建立
　　
　　精密吸取绿原酸浓度为0.0848mg/mL的对照品储备溶液1、2、4、8、10mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：Y＝55799416X－28478.3（r＝0.9999）。结果表明,绿原酸检测浓度在0.0848～0.848μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
　　
　　2.4精密度试验
　　
　　精密吸取对照品溶液10μL,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积。结果RSD＝0.52%,表明本方法精密度良好。
　　
　　2.5稳定性试验
　　
　　取同一批号（0602001）样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件分别在0、1、2、4、6、8h进样,测定绿原酸峰面积。结果RSD＝0.64%,表明供试品溶液在8h之内稳定。
　　
　　2.6重复性试验
　　
　　取同一批号（0602001）样品精密称取0.5g,共6份,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份样品中绿原酸含量。结果绿原酸的平均含量为1.190mg/g,RSD＝0.88%,表明方法重复性良好。
　　
　　2.7加样回收率试验
　　
　　精密称取绿原酸对照品适量,配制成0.0124mg/mL的对照品储备溶液,取同一批号（0602001）样品,研细,混匀,取0.25g,精密称定,共6份,精密加入绿原酸对照品储备溶液各25mL,按照“2.2.2”项下方法制得供回收率用供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果平均回收率为102.60%,RSD＝1.69%。结果见表1。表1加样回收率试验结果（略）
　　
　　8样品含量测定
　　
　　取本品3批,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2样品中绿原酸含量测定结果（略）
　　
　　3讨论
　　
　　取绿原酸对照品的甲醇溶液,在190～650nm波长范围进行扫描,在327nm波长处有较大吸收,与2005年版《中华人民共和国药典》中金银花的测定波长一致,故测定波长选定为327nm。
　　
　　以多种比例乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85、13∶87、10∶90）试验选择流动相[3-5],当比例为10∶90时,绿原酸峰分离度大于1.5,保留时间为6.967min,主峰与杂质峰分离良好,同时无干扰峰,基线平直。