人组织蛋白酶L（CTSL）elisa试剂盒实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人组织蛋白酶 L（CTSL）水平。用纯化的人组织蛋白酶 L（CTSL）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入组织蛋白酶L（CTSL），再与HRP标记的组织蛋白酶L（CTSL）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的组织蛋白酶 L（CTSL）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人组织蛋白酶L（CTSL）浓度。

人组织蛋白酶L（CTSL）ELISA试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释： 本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl， 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

人组织蛋白酶L（CTSL）ELISA试剂盒注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定， 计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5） 。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。