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上海远慕详述: 免疫酶组织化学技术

发布时间:2016/10/28点击次数:182

    免疫酶组织化学技术的概述

    免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)或称免疫细胞化学(1CC)是根据特异性抗原抗体反应的原理来定位组织或细胞内的抗原或抗体成分。自1940年Coons创建了免疫荧光组化技术检测冰冻切片中的相关抗原成分以来,已有60涂年的历史。

    免疫组织化学技术根据示踪物的不同可构成不同的免疫组织化学方法,如标记荧光素或荧光蛋白可构成免疫荧光组化技术;如标记酶(HRP或AKP)可构成免疫酶组化技术;如标记金或铁可构成免疫胶体金(银)或胶体铁技术。

    1967年Nakane创建的免疫酶组织化学技术是目前开展免疫组织化学技术最常用的方法。该技术是借助于抗体与抗原的特异性结合并利用酶作用底物所产生的颜色反应来显示抗原存在的一种技术。其基本原理与免疫荧光技术相同,是在免疫荧光技术基础上发展起来的,所不同的是免疫酶组织化学技术是用酶标记抗体。其方法是以酶作示踪物,与抗原或抗体结合,然后根据酶与底物间产生的可溶性或不溶性颜色产物,借助于光镜或电镜观察细胞及亚细胞水平的抗原或抗体的存在和分布。

    Nakane等将辣根过氧化物酶(HRP)标记在抗体免疫球蛋白分子上,制成酶标抗体,成功地创建了酶标抗体技术。

    1970年,Sternberger利用酶免疫学原理,建立了非标记抗体免疫过氧化物酶法,即PAP复合物法。自那以后,免疫酶组织化学技术有了很大的发展,得到广泛应用,相继出现了亲和免疫组化技术、免疫碱性磷酸酶技术、多聚螯合物酶技术、自动免疫组织化学染色技术等新技术。它与免疫荧光技术相比具有以下优点:

    ①不需要特殊显微镜,目前已成为最常用的IHC方法,应用广泛;

    ②定位准确,对比度好;

    ③染色标本可长期保存;

    ④可用苏木精等染料复染,便于与形态学相结合;

    ⑤显色反应的产物颜色易分辨,且电子密度大,便于光镜及电镜观察;

    ⑥可根据酶和底物/供氢体的不同显示不同的颜色,可非常容易地进行双重或多重染色。

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