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什么是酶联免疫试剂盒

发布时间：2024/6/17点击次数：21

酶联免疫试剂盒
ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒） (以下简称ELISA（酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒）) ：是酶免疫测定技术中应用广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA(酶联免疫吸附试验）法有双抗体夹心法和间接法，者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

酶联免疫试剂盒工作原理
促卵泡素（FSH）是动物脑垂体分泌作用于卵巢卵泡生长、发育、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透过细胞膜,FSH必须与靶细胞
膜上的促卵泡素受体（FSHR）结合,经过受体介导将信息传递到靶细胞内,才能发挥其生物学功能.所提供的ELISA
Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。
样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的洗涤后用底物TMB显
色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

酶联免疫试剂盒工作环境
1． 37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．自动洗板机。
4．单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5．蒸馏水，容量瓶等
6．干净的试管和Eppendof管
酶联免疫试剂盒操作步骤
1．确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2．将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3．酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4．反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5．将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7．将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9．按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应长不要超过30分钟）。
10．用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11．根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

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