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ELISA试剂盒是如何稀释使用的?

发布时间:2024/6/17点击次数:19

  

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

48μmol/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

24μmol/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

12μmol/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

6μmol/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

3μmol/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,

然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 后弃去,如此

重复5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。

 

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