2001年5月，FDA首次颁布了官方生物分析方法指导1。该题为《工业生物分析方法验证指南》的文件作为生物分析方法指南，用来支持临床和非临床研究。
最近，美国药学科学家协会（AAPS）会刊中题为“车间/会议报告----定量生物分析方法验证和执行：色谱和配体法最好的实践”的文章2列出，实物标样测得浓度的重现性和准确度成为具有影响的争辩的论题。有建议提出，在已经测试的实物标样随机抽取样品重新测试，并与原值进行比较，以保证重现性和准确度。与原始测量数据具有显著性差异（>15-20%）的，需要对生物分析方法进行重新评估
验证生物分析方法有效的灵敏度和重现性是药物的药物动力学（PK）、药物生物利用度和生物等效性产生可靠数据的先决条件。方法验证证明一种生物分析方法可以符合《工业生物分析方法验证指南》建议的最低标准，即，具有准确度、精密度、选择性、灵敏度、重现性和稳定性。然而，重复暴露于生物基质中，保证一个验证生物分析方法在定量下限的精密度和准确度对每一个生物分析实验室都是一个挑战。
目的
本研究的目标是证明Thermo Scientific公司生产的TSQ Vantage仪在测试大鼠血浆中帕罗西汀的高灵敏度生物分析实验中表现的耐受性和重现性。将帕罗西汀加于大鼠血浆中，作为包括空白样品、标样、质量控制标准（QCs）的一批样品进样测试。整批样品包括1000个血浆样品，用来叠加5个标准曲线，每个标准曲线200次进样，用来测试重现性和离子源的耐受稳定性。
样品分析：
HPLC泵：Thermo Scientific公司的Accela™ 泵（Thermo Fisher Scientific，San Jose, CA）
自动进样器：CTC PAL (CTC Analytics，Basel，瑞士)
色谱柱：Thermo Scientific公司的Hypersil GOLD™ C18，50mm× 2.1 mm (3μm) （Thermo Fisher Scientific，Bellefonte，PA）
HPLC方法：线性梯度，5min内淋洗液B（乙腈，0.1%甲酸）含量从10%到95%，淋洗液A为0.1%甲酸的水溶液；流速：1mL/min；进样体积：10μL
质谱条件
质谱仪：TSQ Vantage (Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA)
离子化模式：HESI-II，正离子模式
结果和讨论
重现性是生物分析方法的一个重要参数。一种验证的生物分析方法经常因为生物基质所含成分，例如蛋白质、盐分、糖、磷脂和其它成分的连续沉积而受限。保证长效的准确度和精密度的一个关键要素是一个可以非常耐受生物分析样品中的非挥发物的存在的稳健的离子源3。如图1所示，TSQ Vantage在不断暴露于含生物基质的样品之后，仍然可以在高灵敏度下保持良好的重现性。图中在5天内分析1000个大鼠血浆样品（每天200个样品）的过程中，每天测得一个标准曲线，共5个标准曲线（1-500 pg/mL）。该图将5个标准曲线叠放以论证离子源的耐受稳定性。
图2所示为第一天、第三天和第五天的定量下限的色谱图。尽管系统暴露在1000个大鼠血浆样品下，第一天和第五天的信噪比（S/N）基本上没有差别。重现性的稳定性在5天内所测得的面积比的准确度（系统偏差）和精密度（随机误差）上得到体现（见表1）。离子源在高灵敏度下良好的重现性能表现在，定量下限的%CV为5.44%，定量上线的%CV为1.00%。计算浓度（见表2）就变得非常重要，因为正是这些值最终影响到PK参数的研究。
