安捷伦色谱柱的分离效率（简称柱效）>理论塔板数以金丝桃苷峰计算不低于3 000。分离度大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。色谱图见图1。

　　2.4  检测波长的选择

　　取金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解后作紫外全波长扫描，λ286，370 nm, 因286 nm下非黄酮物质也有吸收，为避免干扰，选择检测波长为370 nm。

　　2.5  线性关系的考察

　　分别精密吸取0.021 2 mg·ml-1的金丝桃苷对照品溶液2，4，6，8，10，12，16 μl注入液相色谱仪，测定基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h>峰面积，以金丝桃苷含量（X）为横坐标，其峰面积吸收度积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y = 2 263.9X+2.963 5，r = 0.999  8（n =7），表明金丝桃苷在0.04～0.34 μg线性关系良好。
　　2.6  精密度实验

　　精密吸取0.021 2 mg·ml-1金丝桃苷对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积积分值RSD为0.86%，表明精密度良好。

　　2.7  重复性实验

　　精密称取同一样品粉末1 g（5份），按供试品溶液的制备方法制备，进样10 μl，测得金丝桃苷含量的RSD为0.99%，表明该方法的重复性好。

　　2.8  稳定性实验同一供试品溶液，从制备完毕开始放置，分别于0，2，4，6，8，10 h进样检测，其峰面积积分值RSD为1.9%。表明供试品溶液在10 h内比较稳定。

　　2.9  加样回收率实验

　　取已知含量的药材（6号含量1.60 mg·g-1）样品6份，每份0.50 g，精密称定，计算样品中金丝桃苷量，分别加入适量的金丝桃苷对照品，按样品制备方法和测试条件进行测定，计算加样回收率。结果见表1。表1  地榆中金丝桃苷的加样回收率（略）

　　2.10   样品测定

　　分别精密吸取各样品10 μl进样测定，计算含量，结果见表2。 表2  不同产地地榆样品的金丝桃苷含量（略）

　　3  讨论

　　3.1  提取条件的选择

　　根据金丝桃苷的溶解性能，选择乙醇、甲醇、醋酸乙酯作为提取溶剂，比较了3种提取溶剂提取方法（超声、回流及索氏提取）和不同提取时间（0.5，1.0，1.5 h）对提取效果的影响。结果显示采用超声提取方法的提取率，甲醇提取效果，含量结果表明超声提取1.0 h可使待测成分提取完全。实验证实，含量并未随着提取时间延长而有所增加，超过1 h时含量甚至有下降的趋势。

　　3.2   流动相的选择

　　由于金丝桃苷为黄酮类化合物，本实验采用甲醇和0.2%磷酸溶液的二元流动相体系，但实验中发现拖尾峰（tailing peak）。前者少见。>色谱峰有拖尾现象。经反复实验发现，在1 000 ml的0.2%磷酸溶液中加入1.8 ml三乙胺时的分离效果佳，经多次，多批样品测试，系统具有良好的重复性和稳定性，三乙胺能与ODS柱中键合相的残余硅醇基相互作用，提高分离度，有助于改善峰形。因此以甲醇-0.2%磷酸溶液（46∶54）用三乙胺调pH至3.0为优，分离效果较好，保留时间适中，且无干扰［3］。本方法操作简便、快速、重复性好，适用于地榆中金丝桃苷含量的测定。