1．1 仪器 、试剂和材料

1．1．1  仪 器  高效液相色谱仪系统包括 Water515泵 ，Waters 2475荧光 检测器 ，Empower色谱工作站，Rheodyne 7725 i型手动进样 阀．Sigma 3 K 18高速离心机．超声波振荡器（KQ-250 E型，昆山），混合器（CAT，14—31，日本 ）

1．1．2 试剂  标准样品 ：天冬氨酸 （Asp）、丝氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、组氨酸 （His）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、胱 氨 酸 （cys一2）、酪 氨 酸 （Tyr）、缬 氨 酸（Va1）、蛋 氨 酸 （Met）、赖 氨 酸 （Lys）、异亮 氨 酸（Ile）、亮氨 酸 （Leu）、苯丙 氨酸 （Phe），均 为色谱纯 ，美 国 SIGMA公司 ，L一正缬氨酸 ，色谱纯，医药．3一巯基丙酸 （色谱纯）盐酸 、醋酸钠 、硼酸钠 、氢氧化钠、三乙胺均为分析纯，甲醇、四氢呋喃、乙腈、醋酸均为色谱纯，水为超纯水．

1．1．3 材料 中二级 白肋烟叶

1．2 色谱条件

色谱柱 ：依 利特 c 。柱 （4．6 mm i．d．×250mm，5  m）流动相 A：（1．247±0．025）g醋酸钠 ，溶于适量纯水 ，加 100 wL三乙胺，用体积分数为 1％ 醋酸调 pH值 至 7．20±0．05，再加入 1．5 mL四氢呋喃，混合均匀 ，定溶至 500 mL后用0．45 m的滤膜过滤后备用．流动相 B：（2．520±0．025）g醋酸钠 ，加入 200 mL纯水溶解 ，用体积分数为 1％醋酸调 pH值至 7，20±0．05，加到400 mL乙腈和400mL甲醇的混合物中，混合均匀后用0，45 m的滤膜过滤后备用．流速 ：1．0 mL·min～．柱温 ：40℃． 检测器 ：荧光检测器 ，激发波长 350 Hi，发射波长450 nm．进样量：20 wL．淋洗梯度如表 1．1．3 衍生化试剂的配制 称取邻苯二 甲醛 5 mg于 2 mL的小瓶 中，加入 0．1 mL的甲醇，然后再加入 0．1 moL·L  的缓冲 溶液 1 mL，震荡使其溶解后加入 20 L的 3一巯基 丙酸，震荡均匀后储藏与2 oC的冰箱中待用．

1．4 样品的前处理

称取粉碎后的烟末 2．0 g，放入 50 mL的容量 瓶中，加入 5 mL 0．1 mol·L  的 HC1和 0．2 mL 1．016 mg·L 的 L一正缬氨酸溶液 （内标 ），定容 后用超声波萃取 20 min，然后在高速离心机上以 12 000 r·min 的转速离心 20 min，上清液用干燥 过滤器经 0．45  m微膜过滤．再用微 量吸取器吸 取 25  L硼酸缓冲液加入 1 mL衍生管 中，再吸取 5  OPA试剂加入衍生管中，然后吸取样品过滤过的样品液 10 L，在混合器混合均匀，吸取 5 L

3一MPA试剂，再在 混合 器上 混合 均 匀，放 置10 minflp可进样．

1．5 氨基酸的定性和定量分析

用标样色谱图、文献参照和标样加入的方法， 通过对照保留时间进行定性 ，对氨基酸的出峰顺序 加以确认 ；采用 内标法进行定量分析．即先根据氨 基酸标样与内标物色谱峰的峰 面积之 比与相应的 氨基酸浓度制作各氨基酸的工作曲线，求出相应的 线性方程 ，然后 由待测样品中各氨基酸与内标的色 谱峰峰面积之比，求出相应氨基酸的含量．3  小结 白肋烟叶样品 17种氨基酸测定 的变异系数为

2．32％ -9．24％，标准回收率为 95．．3％ 一100．7％．说 明该方法精密度和准确度较高，而且该方法具有检测 速度快、分离效果好、样品需求量少 ，样品制备程序简单、人为因素影响少等优点，适于推广应用．本企业公司：www.hzrush.com、www.jxsxgs.com。