【药源解析】：AR 是前列腺癌的重要诱因，雄激素合成抑制剂 Zytiga 去年在早期前列腺癌患者中降低 38% 死亡，成为 ASCO 重磅。Xtandi 是 AR 直接拮抗剂，也是重磅药物，去年被辉瑞收购。有望成为个进入临床的 PROTAC 药物 ARV-110 也是降解 AR。可见 AR 依然是个非常重要的靶点。

通常化合物的靶点活性是通过纯化蛋白系统测量，但这个系统一般在缓冲液里，与真正的细胞内环境相差很大。细胞内有大量与小分子化合物结合的蛋白，降低药物有效浓度。化合物即使能进入细胞也也不一定能有效进入靶点所在的小区，所以活性好未必能见到靶点。另外因为技术原因纯化蛋白经常不是整个蛋白，而是其中一段，片段蛋白与小分子配体结合力可能与整个蛋白不同。后蛋白在细胞内可能与其它蛋白形成复合物才有活性，这个性质在纯化系统中也不存在。这类似学英语时带耳机听标准英语与在酒吧嘈杂的环境里与有口音美国人交流的区别。

所以很多在纯化系统活性很高的化合物在真正的细胞内活性并不好，造成出现 PK-PD 失联。而细胞内的靶点结合能力并不容易测量，通常细胞试验都是间接测量目标靶点活性，不能区分靶点活性和通路活性。这个可能增加开发风险，因为靶点一般通过基因学实验确证，只有直接与目标蛋白结合才可能重复基因学数据。抑制通路上其它蛋白虽然可以改变目标参数，但不一定能完全与抑制目标蛋白功能一致。

近年来出现几个直接策略细胞内与靶点结合的技术，CETSA 是其中之一。这个技术不需要标记蛋白、也不需要标记化合物，所以比较容易操作。蛋白与配体结合后通常热稳定会增加，所以通过加热被化合物处理过的细胞、追踪目标蛋白的变性温度与化合物浓度关系可以测量化合物在细胞内与目标蛋白直接结合的能力。这个实验与一般 CETSA 还有所不同，因为作者发现 AR 拮抗剂与 AR 结合并不改变变性温度，但激动剂 DHT 则可增加热稳定性。拮抗剂可以取代 DHT 因此把 AR 热稳定恢复到游离 AR 水平。这个工作说明 CETSA 可以作为高通量筛选平台。理论上 CETSA 也可同时跟踪不同蛋白而测定化合物在细胞内复杂环境下的选择性，这可能是对小分子药物研发更重要的工作。