Figure.1 CCK-8（WST-8）反应机制

实验原理：

WST-8属于MTT的升级产品，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

用途：

CCK-8法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增  殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

为什么将Cell Counting Kit (CCK-8) 作为细胞增殖与毒性检测佳选择：

• 如下表，CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较，结果不言而喻！

* 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到佳测定时间

* 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰（扣除空白孔即可）

如何选择合适的CCK-8检测试剂盒？

目前市面上能提供的【CCK-8】细胞增殖／毒性检测试剂盒有国产分装或原产的，国产分装的CCK-8试剂盒在质量稳定性上有不足。而原产于国内实验室的CCK-8试剂盒有些具有较好的检测结果，在批次之间的稳定性上较难控制。至于原装进口供应CCK-8试剂盒的进口品牌并不多，就连Abcam、Thermo，Sigma等等几个品牌都不能够提供CCK-8试剂盒，而其它品牌在性价比上远逊于Abbkine产品。

作为Abbkine品牌旗下首款细胞分析旗舰产品，Cell Counting Kit (CCK-8)，Abbkine研发工程师为其倾注了大量的投入，不断摸索优化佳的配方，每一份努力只为让科研工作者更加简单，高效，稳定地获取珍贵的科研数据。

本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

《【CCK-8】细胞增殖／毒性检测试剂盒综合对比》

实验注意事项：

• 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
• 有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。
• 白细胞可能需要培养较长时间。
• 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
• 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度。
• 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

更多详情：请浏览下方链接

CCK-8实验操作指南：http://www.docin.com/p-1853035994.html

CCK-8常见问题汇总：http://www.docin.com/p-1853035993.html

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